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bruno1

铜虫 (小有名气)

[求助] 发酵液蛋白提取 已有3人参与

求助一种胞外蛋白提取试剂盒,或者发酵液中蛋白质的提取方法,十分感谢

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新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心应助! 2016-01-14 13:58:04
1:你的表达系统是什么?
2:发酵液中蛋白质的提取方法是  离心-上清0.22um滤膜过滤-后面收集的上清中加入100%TCA,4度沉淀4-8h,有时候也过夜,我有看过说-20度沉淀过夜的,我试过,液体冻起来了,感觉效果不是很好,沉淀完后10,000G离心30min,小心去掉上清,这时就能看到沉淀,再加入2ml丙酮洗一遍,晾干去除丙酮,再用一定体积的TE溶解(一般浓缩100倍,9ml上清到90ulTE)。
你参考我上面写的方法应该能跑出条带的,即使目的蛋白没表达,也会有菌体自身分泌的蛋白的,实验就是这样,反反复复,只要每次条件有点改变,不是简单的重复就好,结果总会出来的
2楼2016-01-14 10:37:06
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bruno1

铜虫 (小有名气)

我不是要跑电泳,我是想提出来,不破坏蛋白,加到其他发酵液里面去发酵,也可以用这样的方法吗?

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3楼2016-01-14 16:52:26
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

硫酸氨盐析,盐析完了在层析。祝顺利
4楼2016-01-18 11:23:51
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hc2015

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 注册商家也只能在广告区发广告,其它区发广告仍属违规 2016-05-05 22:14:35
本帖内容被屏蔽

5楼2016-02-15 11:30:57
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