应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 是个小白，求助关于pcr，跑电泳，没p出条带，点样孔会亮。
131/2返回列表12下一页
查看: 2161  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

俊锋

新虫 (初入文坛)

[求助] 是个小白，求助关于pcr，跑电泳，没p出条带，点样孔会亮。 已有4人参与

做5‘RACE   PCR
提取植物的RNA后，用Smart试剂盒反转录出cDNA，以cDNA为模板，做pcr，没p出条带，点样孔会亮，做了两次pcr，两次都出现这种情况
第一次做pcr的时候用了两个模板，退火温度是70与64，点样孔没亮；温度是60与55，点样孔会亮的。
第二次做pcr，希释一个模板，做温度梯度pcr，温度设在63  61.4  58.9  56  53.5  51.9  51度，63度点样孔没亮，其他的都亮了，没p出条带。
其他师姐他们用同一个pcr仪可以p出条带。
现在做这个实验换了几次试剂盒，再做下去老师的钱都被我用光了。
求个位大神帮帮忙忙

是个小白，求助关于pcr，跑电泳，没p出条带，点样孔会亮。
第二次pcr电泳图
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-01-11 10:19:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

反应链

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 俊锋 at 2016-01-11 11:23:07
RNA跑电泳的时候，28s与18s比较亮便用做模板，5s不怎么亮...

How about your positive control, which used the cDNA template for housekeeping gene amplification, such as Actin?
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2016-01-11 11:38:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

奇怪人生123

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:41:56
看图片 猜测是堵孔了   想知道楼主配PCR的反应体系 尤其是cDNA的量（不能多） 以及扩增的循环数
赞一下(1人) 回复此楼
实时荧光定量PCR（TaqMan探针法）欢迎和大家探讨~
2楼2016-01-11 10:48:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

反应链

新虫 (正式写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:42:07
How was the quality of your RNA extracted?

I think your PCR templates were rich in poly/oligosaccharides, polyphenols and other unknown sticky compounds that bind or co-precipitae with DNA and form a viscous complex. Such DNA sample is usually neither suitable for PCR amplification nor even possible to load into the electrophoresis well.
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2016-01-11 10:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人小红花或者玫瑰，手有余香，俺期待您更多精彩。 2016-01-12 20:42:19
你的RNA和cDNA怎么样，如果没问题，先做一遍试剂盒里的阳性对照。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2016-01-11 11:49:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

俊锋

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 奇怪人生123 at 2016-01-11 10:48:41
看图片 猜测是堵孔了   想知道楼主配PCR的反应体系 尤其是cDNA的量（不能多） 以及扩增的循环数

扩增循环数：25   cDNA的量用的是 ：SMART试剂盒做出之后，用90ul EDTA稀释后，加2.5ul cDNA为模板。
赞一下 回复此楼
4楼2016-01-11 11:17:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

俊锋

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 反应链 at 2016-01-11 10:59:15
How was the quality of your RNA extracted?

I think your PCR templates were rich in poly/oligosaccharides, polyphenols and other unknown sticky compounds that bind or co-precipitae with DNA and fo ...

RNA跑电泳的时候，28s与18s比较亮便用做模板，5s不怎么亮
赞一下 回复此楼
5楼2016-01-11 11:23:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

俊锋

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 俊锋 at 2016-01-11 11:23:07
RNA跑电泳的时候，28s与18s比较亮便用做模板，5s不怎么亮...

跑RNA电泳的时候却RNA可以跑出来，cDNA跑电泳的时候，也有尼散的条带。还是说杂质一直在RNA那里，然后在DNA量太多了然后跑不出来吗
赞一下 回复此楼
7楼2016-01-11 11:42:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

俊锋

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2016-01-11 11:49:26
你的RNA和cDNA怎么样，如果没问题，先做一遍试剂盒里的阳性对照。

阳性对照是为了检测目的在于检测什么的啊？
赞一下 回复此楼
9楼2016-01-11 12:02:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

俊锋

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2016-01-11 11:49:26
你的RNA和cDNA怎么样，如果没问题，先做一遍试剂盒里的阳性对照。

RNA跑电泳的时候，比较亮，条带与师兄师姐做pcr的一样，就是没有做个OD260/0D280比较，所以没能准确地说RNA模板没问题。
赞一下 回复此楼
10楼2016-01-11 12:07:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 俊锋 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +3 布布和一二 2026-08-08 3/150 2026-08-08 18:15 by Lightingo
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 17:02 by oEVWOejN9taj
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:22 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 15:07 by oEVWOejN9taj
[基金申请] fileCode有新解读？ +9 Tide man 2026-08-08 17/850 2026-08-08 14:56 by archvillain
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +5 布布和一二 2026-08-08 8/400 2026-08-08 14:54 by archvillain
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:47 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +11 且听虎啸 2026-08-07 14/700 2026-08-08 12:50 by 布布和一二
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 10:19 by 3OOjAIS77qg2
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭