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是个小白，求助关于pcr，跑电泳，没p出条带，点样孔会亮。已有4人参与
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做5‘RACE PCR 提取植物的RNA后，用Smart试剂盒反转录出cDNA，以cDNA为模板，做pcr，没p出条带，点样孔会亮，做了两次pcr，两次都出现这种情况 第一次做pcr的时候用了两个模板，退火温度是70与64，点样孔没亮；温度是60与55，点样孔会亮的。 第二次做pcr，希释一个模板，做温度梯度pcr，温度设在63 61.4 58.9 56 53.5 51.9 51度，63度点样孔没亮，其他的都亮了，没p出条带。 其他师姐他们用同一个pcr仪可以p出条带。 现在做这个实验换了几次试剂盒，再做下去老师的钱都被我用光了。 求个位大神帮帮忙忙  第二次pcr电泳图 |
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10楼2016-01-11 12:07:15
奇怪人生123
银虫 (小有名气)
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2楼2016-01-11 10:48:41
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:42:07
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:42:07
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How was the quality of your RNA extracted? I think your PCR templates were rich in poly/oligosaccharides, polyphenols and other unknown sticky compounds that bind or co-precipitae with DNA and form a viscous complex. Such DNA sample is usually neither suitable for PCR amplification nor even possible to load into the electrophoresis well. |
3楼2016-01-11 10:59:15
4楼2016-01-11 11:17:45