应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 是个小白，求助关于pcr，跑电泳，没p出条带，点样孔会亮。
51/1返回列表
查看: 2172  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

俊锋

新虫 (初入文坛)

[求助] 是个小白，求助关于pcr，跑电泳，没p出条带，点样孔会亮。 已有4人参与

做5‘RACE   PCR
提取植物的RNA后，用Smart试剂盒反转录出cDNA，以cDNA为模板，做pcr，没p出条带，点样孔会亮，做了两次pcr，两次都出现这种情况
第一次做pcr的时候用了两个模板，退火温度是70与64，点样孔没亮；温度是60与55，点样孔会亮的。
第二次做pcr，希释一个模板，做温度梯度pcr，温度设在63  61.4  58.9  56  53.5  51.9  51度，63度点样孔没亮，其他的都亮了，没p出条带。
其他师姐他们用同一个pcr仪可以p出条带。
现在做这个实验换了几次试剂盒，再做下去老师的钱都被我用光了。
求个位大神帮帮忙忙

是个小白，求助关于pcr，跑电泳，没p出条带，点样孔会亮。
第二次pcr电泳图
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-01-11 10:19:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

俊锋

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2016-01-11 11:49:26
你的RNA和cDNA怎么样，如果没问题，先做一遍试剂盒里的阳性对照。

阳性对照是为了检测目的在于检测什么的啊？
赞一下 回复此楼
9楼2016-01-11 12:02:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

奇怪人生123

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:41:56
看图片 猜测是堵孔了   想知道楼主配PCR的反应体系 尤其是cDNA的量（不能多） 以及扩增的循环数
赞一下(1人) 回复此楼
实时荧光定量PCR（TaqMan探针法）欢迎和大家探讨~
2楼2016-01-11 10:48:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

反应链

新虫 (正式写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:42:07
How was the quality of your RNA extracted?

I think your PCR templates were rich in poly/oligosaccharides, polyphenols and other unknown sticky compounds that bind or co-precipitae with DNA and form a viscous complex. Such DNA sample is usually neither suitable for PCR amplification nor even possible to load into the electrophoresis well.
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2016-01-11 10:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

俊锋

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 奇怪人生123 at 2016-01-11 10:48:41
看图片 猜测是堵孔了   想知道楼主配PCR的反应体系 尤其是cDNA的量（不能多） 以及扩增的循环数

扩增循环数：25   cDNA的量用的是 ：SMART试剂盒做出之后，用90ul EDTA稀释后，加2.5ul cDNA为模板。
赞一下 回复此楼
4楼2016-01-11 11:17:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 17/850 2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +5 布布和一二 2026-08-10 6/300 2026-08-11 10:15 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +5 瞬息宇宙 2026-08-10 5/250 2026-08-11 09:29 by 铁帽子农民
[基金申请] 帮忙看看fileCode +6 wwncly 2026-08-10 11/550 2026-08-11 09:14 by xiaruohan
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭