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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 用大肠杆菌表达重组蛋白，总在摇瓶扩大时出现先浑后澄清和诱导后变澄清的现象，为什么
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chenkaihao

银虫 (小有名气)

[求助] 用大肠杆菌表达重组蛋白，总在摇瓶扩大时出现先浑后澄清和诱导后变澄清的现象，为什么 已有7人参与

在用大肠杆菌表达重组蛋白（有毒的和普通的）时，总出现扩大时变澄清，即首先测OD=0.3,后来测又是0.1的现象；或诱导一段时间后变清，收到的菌体很少，平常离心参数下，菌体离不下来的情况。噬菌体感染的状况基本很少，无菌操作没问题。但是同一瓶活化液再次扩大，它又扩大成功了；有时同一瓶活化液扩大几瓶，会出现一瓶摇澄清，另几瓶正常的现象。
现在很头疼，麻烦各位虫友解答下，拜托了。
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就算是羽毛，它也能在天空畅游
1楼 2016-01-06 10:00:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by chenkaihao at 2016-01-12 17:32:10
新转化的也出现此情况，主要是发生的很频繁。同一操作下，有的同一蛋白一清一混，不同蛋白也出现这样的状况...

原始菌种(越早保存的越好)，重新做感受态吧！

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8楼2016-01-12 19:58:12
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原海亮

木虫 (著名写手)
我倒觉得噬菌体污染的可能性很大的，我们也常出现这样状况，通常是那一批感受态扔掉，重新做一批，另外出现变澄清的菌液不要随手倒掉，连瓶子一起灭菌处理。

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
9楼2016-01-12 20:50:38
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肖大爷1314

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这事不奇怪。经常出现。两个方面分析我建议
首先，你若是挑的单克隆。换个单克隆试试。这极有可能是这个单克隆的特性。
然后，如果换了还不行。换个骨架试试。这很有可能是细胞毒性的问题。换一个对leak控制更严格的载体。或者表达系统。如果排除细胞毒性的话，你可以看看是不是基因在载体上连反了，连反了好像也会这样，iptg的量也要注意~
最后，LZ祝顺利~
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追求真理的道路上永远不会孤独
2楼2016-01-06 10:22:01
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小花木兰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个问题的确头疼，我们也经常遇到，有时大罐上也有。目前没有找到原因
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3楼2016-01-06 15:21:57
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感受态(出发菌株)退化引起的
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4楼2016-01-06 16:30:10
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个情况我们也遇见过，一直没有解决，我们是同一个试管转的两个三角瓶，结果一个就长起来了，一个就没有！
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I am not a hero , but I served with heroes！
5楼2016-01-06 20:56:12
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chenkaihao

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肖大爷1314 at 2016-01-06 10:22:01
这事不奇怪。经常出现。两个方面分析我建议
首先，你若是挑的单克隆。换个单克隆试试。这极有可能是这个单克隆的特性。
然后，如果换了还不行。换个骨架试试。这很有可能是细胞毒性的问题。换一个对leak控制更严格 ...

应该不是本底表达引起，毕竟有摇混过的现象，且纯化到了蛋白。
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就算是羽毛，它也能在天空畅游
6楼2016-01-12 17:30:15
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chenkaihao

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ganchao1776 at 2016-01-06 16:30:10
感受态(出发菌株)退化引起的

新转化的也出现此情况，主要是发生的很频繁。同一操作下，有的同一蛋白一清一混，不同蛋白也出现这样的状况
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就算是羽毛，它也能在天空畅游
7楼2016-01-12 17:32:10
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xingwancai

新虫 (初入文坛)
噬菌体侵染！

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10楼2016-01-12 21:09:33
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