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chenkaihao

银虫 (小有名气)

[求助] 用大肠杆菌表达重组蛋白,总在摇瓶扩大时出现先浑后澄清和诱导后变澄清的现象,为什么 已有7人参与

在用大肠杆菌表达重组蛋白(有毒的和普通的)时,总出现扩大时变澄清,即首先测OD=0.3,后来测又是0.1的现象;或诱导一段时间后变清,收到的菌体很少,平常离心参数下,菌体离不下来的情况。噬菌体感染的状况基本很少,无菌操作没问题。但是同一瓶活化液再次扩大,它又扩大成功了;有时同一瓶活化液扩大几瓶,会出现一瓶摇澄清,另几瓶正常的现象。
现在很头疼,麻烦各位虫友解答下,拜托了。
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就算是羽毛,它也能在天空畅游
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
7楼: Originally posted by chenkaihao at 2016-01-12 17:32:10
新转化的也出现此情况,主要是发生的很频繁。同一操作下,有的同一蛋白一清一混,不同蛋白也出现这样的状况...

原始菌种(越早保存的越好),重新做感受态吧!

发自小木虫Android客户端
8楼2016-01-12 19:58:12
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原海亮

木虫 (著名写手)

我倒觉得噬菌体污染的可能性很大的,我们也常出现这样状况,通常是那一批感受态扔掉,重新做一批,另外出现变澄清的菌液不要随手倒掉,连瓶子一起灭菌处理。

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
9楼2016-01-12 20:50:38
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普通回帖

肖大爷1314

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这事不奇怪。经常出现。两个方面分析我建议
首先,你若是挑的单克隆。换个单克隆试试。这极有可能是这个单克隆的特性。
然后,如果换了还不行。换个骨架试试。这很有可能是细胞毒性的问题。换一个对leak控制更严格的载体。或者表达系统。如果排除细胞毒性的话,你可以看看是不是基因在载体上连反了,连反了好像也会这样,iptg的量也要注意~
最后,LZ祝顺利~
追求真理的道路上永远不会孤独
2楼2016-01-06 10:22:01
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小花木兰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个问题的确头疼,我们也经常遇到,有时大罐上也有。目前没有找到原因
3楼2016-01-06 15:21:57
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感受态(出发菌株)退化引起的
4楼2016-01-06 16:30:10
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个情况我们也遇见过,一直没有解决,我们是同一个试管转的两个三角瓶,结果一个就长起来了,一个就没有!
I am not a hero , but I served with heroes!
5楼2016-01-06 20:56:12
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chenkaihao

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 肖大爷1314 at 2016-01-06 10:22:01
这事不奇怪。经常出现。两个方面分析我建议
首先,你若是挑的单克隆。换个单克隆试试。这极有可能是这个单克隆的特性。
然后,如果换了还不行。换个骨架试试。这很有可能是细胞毒性的问题。换一个对leak控制更严格 ...

应该不是本底表达引起,毕竟有摇混过的现象,且纯化到了蛋白。
就算是羽毛,它也能在天空畅游
6楼2016-01-12 17:30:15
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chenkaihao

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ganchao1776 at 2016-01-06 16:30:10
感受态(出发菌株)退化引起的

新转化的也出现此情况,主要是发生的很频繁。同一操作下,有的同一蛋白一清一混,不同蛋白也出现这样的状况
就算是羽毛,它也能在天空畅游
7楼2016-01-12 17:32:10
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xingwancai

新虫 (初入文坛)

10楼2016-01-12 21:09:33
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