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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重叠PCR有杂带
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xiaomogu123

新虫 (初入文坛)

[交流] 重叠PCR有杂带 已有6人参与

做两个小片段的重叠PCR。两个小片段都没有杂带，重叠后出现杂带，重复过还是一样的结果。两个小片段大小都是180左右，退火温度设的52度。求指点，谢谢！

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1楼 2015-12-27 11:53:03
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siriusxuan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有杂带又怎么了？跑胶分离出预期条带，然后克隆出来鉴定不就行了？
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
2楼2015-12-27 23:45:01
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王者归来001

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以用一个Touch-down的程序，把退火温度调高些试试。
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坚持不懈,终会成功!
3楼2015-12-28 13:26:53
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xiaomogu123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-12-27 23:45:01
有杂带又怎么了？跑胶分离出预期条带，然后克隆出来鉴定不就行了？

胶回收的话浓度太低，没法酶切。

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4楼2015-12-29 08:48:41
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xiaomogu123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王者归来001 at 2015-12-28 13:26:53
可以用一个Touch-down的程序，把退火温度调高些试试。

谢谢！

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5楼2015-12-29 08:49:34
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siriusxuan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaomogu123 at 2015-12-29 08:48:41
胶回收的话浓度太低，没法酶切。
...

TA克隆然后扩增T载体，浓度有多低？2ng都没有？？？
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此座可言轻社稷，江山万里起风尘。
6楼2015-12-29 08:53:06
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yeast140208

新虫 (初入文坛)
退火温度太低
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7楼2015-12-29 13:20:06
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huxi_8

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物退火温度太低，肯定会有非特异扩增。

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huxi
8楼2015-12-29 16:23:01
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纳米之心

木虫 (文坛精英)
祝福楼主
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火星人要回火星了！！！
9楼2015-12-29 16:40:30
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zzhjiangnan

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
直接酶切连接转化，挑出阳性转化子即可
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10楼2015-12-29 20:21:30
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