应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 重叠PCR第一轮切割的200bp小片段总是有很多杂带且很暗，怎么办？
51/1返回列表
查看: 1456  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

odelay

铜虫 (小有名气)

[求助] 重叠PCR第一轮切割的200bp小片段总是有很多杂带且很暗，怎么办？ 已有1人参与

重叠PCR第一轮切割的200多bp小片段总是有很多杂带且很暗，怎么办？
第一轮PCR体系：dH2O      17.65μL
           5*Ps buffer     6μL
           dNTP          2.4μL
           DMSO         1.5μL
           Primxstar       0.15μL
           模板           1.5μL
           引物（P1、P2） 0.4μL
           或（P3、P4）
                                              ——30μL体系
PCR程序: 95︒C   05:00
           95︒C   01:00
           52︒C   01:00
           72︒C   1:40
           72︒C   10:00
           10︒C   结束
           30个循环

重叠PCR第一轮切割的200bp小片段总是有很多杂带且很暗，怎么办？
4 2014-12-02 19hr 07min.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-12-17 10:14:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
odelay: 金币+2 2014-12-17 15:21:53
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-17 19:51:20
非特异性扩增太多条带，切胶产物可能不是很纯，试着将退火温度提高几点试试，或者采用降落PCR，能够很好的减少非特异性扩增。
赞一下 回复此楼
rainwater
2楼2014-12-17 13:35:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

odelay

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-12-17 13:35:20
非特异性扩增太多条带，切胶产物可能不是很纯，试着将退火温度提高几点试试，或者采用降落PCR，能够很好的减少非特异性扩增。

怎么个降落PCR法啊
赞一下 回复此楼
3楼2014-12-17 15:21:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-17 19:51:30
引用回帖:
3楼: Originally posted by odelay at 2014-12-17 15:21:43
怎么个降落PCR法啊...

降落PCR就是将前两个循环的退火温度设定比引物的Tm值高5℃，每两个循环降低2℃，降至Tm值低5℃，然后在采用此温度进行下面20-25个循环的PCR扩增
赞一下 回复此楼
rainwater
4楼2014-12-17 16:25:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

odelay

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-12-17 16:25:53
降落PCR就是将前两个循环的退火温度设定比引物的Tm值高5℃，每两个循环降低2℃，降至Tm值低5℃，然后在采用此温度进行下面20-25个循环的PCR扩增...

听着很难啊，我摸索摸索，谢啦
赞一下 回复此楼
5楼2014-12-17 20:27:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 odelay 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 11:51 by xiangy672
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 能否申诉？ +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭