应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 重叠PCR第一轮切割的200bp小片段总是有很多杂带且很暗，怎么办？
51/1返回列表
查看: 1310  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

odelay

铜虫 (小有名气)

[求助] 重叠PCR第一轮切割的200bp小片段总是有很多杂带且很暗，怎么办？ 已有1人参与

重叠PCR第一轮切割的200多bp小片段总是有很多杂带且很暗，怎么办？
第一轮PCR体系：dH2O      17.65μL
           5*Ps buffer     6μL
           dNTP          2.4μL
           DMSO         1.5μL
           Primxstar       0.15μL
           模板           1.5μL
           引物（P1、P2） 0.4μL
           或（P3、P4）
                                              ——30μL体系
PCR程序: 95︒C   05:00
           95︒C   01:00
           52︒C   01:00
           72︒C   1:40
           72︒C   10:00
           10︒C   结束
           30个循环

重叠PCR第一轮切割的200bp小片段总是有很多杂带且很暗，怎么办？
4 2014-12-02 19hr 07min.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-12-17 10:14:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

odelay

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-12-17 13:35:20
非特异性扩增太多条带，切胶产物可能不是很纯，试着将退火温度提高几点试试，或者采用降落PCR，能够很好的减少非特异性扩增。

怎么个降落PCR法啊
赞一下 回复此楼
3楼2014-12-17 15:21:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
odelay: 金币+2 2014-12-17 15:21:53
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-17 19:51:20
非特异性扩增太多条带，切胶产物可能不是很纯，试着将退火温度提高几点试试，或者采用降落PCR，能够很好的减少非特异性扩增。
赞一下 回复此楼
rainwater
2楼2014-12-17 13:35:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-17 19:51:30
引用回帖:
3楼: Originally posted by odelay at 2014-12-17 15:21:43
怎么个降落PCR法啊...

降落PCR就是将前两个循环的退火温度设定比引物的Tm值高5℃，每两个循环降低2℃，降至Tm值低5℃，然后在采用此温度进行下面20-25个循环的PCR扩增
赞一下 回复此楼
rainwater
4楼2014-12-17 16:25:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

odelay

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-12-17 16:25:53
降落PCR就是将前两个循环的退火温度设定比引物的Tm值高5℃，每两个循环降低2℃，降至Tm值低5℃，然后在采用此温度进行下面20-25个循环的PCR扩增...

听着很难啊，我摸索摸索，谢啦
赞一下 回复此楼
5楼2014-12-17 20:27:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +7 丹青奶盖 2026-03-26 7/350 2026-03-26 19:18 by macy2011
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 274求调剂 +14 顾九笙要谦虚 2026-03-24 20/1000 2026-03-26 18:15 by 乐呵呵的追梦人
[考研] 085600材料与化工306 +7 z1z2z3879 2026-03-21 7/350 2026-03-26 17:59 by fmesaito
[考研] 271求调剂 +6 生如夏花… 2026-03-22 6/300 2026-03-26 16:48 by 张凯十八号
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 7/350 2026-03-26 16:07 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂310 +3 温柔的晚安 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:16 by peike
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-23 4/200 2026-03-25 17:04 by CoderLoser
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭