应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 重叠PCR第一轮切割的200bp小片段总是有很多杂带且很暗，怎么办？
51/1返回列表
查看: 1313  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

odelay

铜虫 (小有名气)

[求助] 重叠PCR第一轮切割的200bp小片段总是有很多杂带且很暗，怎么办？ 已有1人参与

重叠PCR第一轮切割的200多bp小片段总是有很多杂带且很暗，怎么办？
第一轮PCR体系：dH2O      17.65μL
           5*Ps buffer     6μL
           dNTP          2.4μL
           DMSO         1.5μL
           Primxstar       0.15μL
           模板           1.5μL
           引物（P1、P2） 0.4μL
           或（P3、P4）
                                              ——30μL体系
PCR程序: 95︒C   05:00
           95︒C   01:00
           52︒C   01:00
           72︒C   1:40
           72︒C   10:00
           10︒C   结束
           30个循环

重叠PCR第一轮切割的200bp小片段总是有很多杂带且很暗，怎么办？
4 2014-12-02 19hr 07min.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-12-17 10:14:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-17 19:51:30
引用回帖:
3楼: Originally posted by odelay at 2014-12-17 15:21:43
怎么个降落PCR法啊...

降落PCR就是将前两个循环的退火温度设定比引物的Tm值高5℃，每两个循环降低2℃，降至Tm值低5℃，然后在采用此温度进行下面20-25个循环的PCR扩增
赞一下 回复此楼
rainwater
4楼2014-12-17 16:25:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
odelay: 金币+2 2014-12-17 15:21:53
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-17 19:51:20
非特异性扩增太多条带，切胶产物可能不是很纯，试着将退火温度提高几点试试，或者采用降落PCR，能够很好的减少非特异性扩增。
赞一下 回复此楼
rainwater
2楼2014-12-17 13:35:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

odelay

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-12-17 13:35:20
非特异性扩增太多条带，切胶产物可能不是很纯，试着将退火温度提高几点试试，或者采用降落PCR，能够很好的减少非特异性扩增。

怎么个降落PCR法啊
赞一下 回复此楼
3楼2014-12-17 15:21:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

odelay

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-12-17 16:25:53
降落PCR就是将前两个循环的退火温度设定比引物的Tm值高5℃，每两个循环降低2℃，降至Tm值低5℃，然后在采用此温度进行下面20-25个循环的PCR扩增...

听着很难啊，我摸索摸索，谢啦
赞一下 回复此楼
5楼2014-12-17 20:27:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 0856调剂 +4 求求让我有书读� 2026-03-26 5/250 2026-03-26 15:54 by dick_runner
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 289求调剂 +9 怀瑾握瑜l 2026-03-20 9/450 2026-03-25 11:02 by userper
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 0703化学调剂，求导师收 +7 天天好运来上岸� 2026-03-24 7/350 2026-03-24 20:26 by peike
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭