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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xiaomogu123

新虫 (初入文坛)

[交流] 重叠PCR有杂带 已有6人参与

做两个小片段的重叠PCR。两个小片段都没有杂带,重叠后出现杂带,重复过还是一样的结果。两个小片段大小都是180左右,退火温度设的52度。求指点,谢谢!

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zzhjiangnan

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
直接酶切连接转化,挑出阳性转化子即可
10楼2015-12-29 20:21:30
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siriusxuan

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有杂带又怎么了?跑胶分离出预期条带,然后克隆出来鉴定不就行了?
此座可言轻社稷,江山万里起风尘。
2楼2015-12-27 23:45:01
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王者归来001

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以用一个Touch-down的程序,把退火温度调高些试试。
坚持不懈,终会成功!
3楼2015-12-28 13:26:53
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xiaomogu123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by siriusxuan at 2015-12-27 23:45:01
有杂带又怎么了?跑胶分离出预期条带,然后克隆出来鉴定不就行了?

胶回收的话浓度太低,没法酶切。

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4楼2015-12-29 08:48:41
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