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maoxuequn

新虫 (小有名气)

[求助] 植物基因组DNA的提取,求实验指导啊。 已有3人参与

一直用上海生工的快速植物基因组试剂盒提取,
可是提取的基因就是不理想啊不理想。
为什么啊?
我们实验室提取的时候 注意的点是 加两次PP,然后乙醇挥发的时候要挥发干 而不是10分钟就好。
可是我就是提取的不好,RNase降解酶也有,然后液氮也是快速研磨,叶子也是新鲜嫩叶子。
可是我尝试了很多次,就是提取不好。
求实验指导啊。
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溪偌飘纤

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们实验室用的是改良CTAB法,操作时间长,可是效果特别好,我们一般都提老标本的,像楼主的的新鲜叶片用此种方法应该更没问题吧
3楼2016-01-04 09:57:30
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xygcdmr

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先提的不好具体是什么情况,蛋白多,弥散,还是DNA量少?不能指导太多
几点经验:1 研磨充分、取样不要太多(提取液能力有限);
               2 你那个盒子没用过,但是都应该操作严格(静置,混匀,离心等);
2楼2015-12-25 21:47:20
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雨儿天0320

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我们实验室用的是TaKaRa的试剂盒,提取植物DNA还不错,但是也要严格按照方法操作,才能更稳定
4楼2016-01-04 10:52:28
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反应链

新虫 (正式写手)

You could try this protocol, which is very useful for plant total DNA extraction.

I hope you could improve the CTAB method for Soil microorganism total DNA extraction by drawing lessons from this protocol.

3% CTAB DNA extracion protocol
(modified from Zeng et al. 2002, ACta Botanica Sinica 44; 694-697)

1. washing out polysaccharides with CTAB-free buffer from homogenate.
2. increasing the percentage of CTAB in extraction medium.
3. using high concentration salts pior to DNA precipitation with isopanol.

植物基因组DNA的提取,求实验指导啊。

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5楼2016-01-05 21:39:57
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