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i760912798

木虫 (正式写手)

[求助] PCR退火温度设定多少合适已有11人参与

我刚到拿到合成的引物,引物合成单上的一条引物的Tm值为54℃,一条引物Tm值为50℃,pcr退火温度设定多少合适?我想设定退火温度为53℃,不知道是否合适?
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SorryJ

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这引物怎么设计的啊?才50°的退火温度。你引物不会低于16nt吧?一般在60左右比较好。你这种情况个人觉得用50度试试,如果不行,设置一个梯度实验,45~55之间吧!

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5楼2015-12-20 00:13:17
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普通回帖

取个什么名啊

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个你做一个梯度pcr,摸一下退火温度,跑个胶看一下就行了

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2楼2015-12-19 19:08:17
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
退火温度以TM值较小的为准,退火温度一般设为比TM值小5-10度,最佳温度得实验摸索。你这对我看设45度较合适。
生物科学
3楼2015-12-19 20:39:50
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yvonne9044

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-19 20:39:50
退火温度以TM值较小的为准,退火温度一般设为比TM值小5-10度,最佳温度得实验摸索。你这对我看设45度较合适。

45℃,你确定?

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4楼2015-12-19 23:18:42
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ncuskxinxin

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般50到55最好,如果这个区间不能扩增出来,其他的也够呛了

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6楼2015-12-20 00:36:45
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glove94

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以的话,摸梯度的时候温度跨度可以大一点,47~57度试试,不过最有可能的Tm可能就是在50~54之间

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7楼2015-12-20 00:51:13
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邬家栋2014

银虫 (初入文坛)

取平均52就OK

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8楼2015-12-20 01:04:07
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科学小覃

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yvonne9044 at 2015-12-19 23:18:42
45℃,你确定?
...

退火温度不可能比TM值大,但又不能太低,你这对引物只能是45度左右了。可以上下调整2度。
生物科学
9楼2015-12-20 08:17:36
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maboya2008

铜虫 (小有名气)

合成单上的只是参考,不同方法计算出来的TM值都不一样,我之前在不同的公司合成的同一引物,给的TM值都不一样。还是建议你自己做个梯度吧

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10楼2015-12-20 09:20:59
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