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金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

我个人的经验设计引物tm一般是在60度左右（57-62看实际情况），同时两条引物tm相差不超过1度。PCR时先55度看有没有条带效果如何，然后根据需要提高到60度，不过我一般都是直接60度pcr。当然要是没有什么经验的话直接温度梯度。。。不过你设计的Tm50度个人觉得太低了。。而且误差了4度。

21楼2015-12-21 18:13:39

铜虫 (初入文坛)

你的退火温度有点低，这个温度是要在网站上算出来的

时间可以改变一切！

22楼2015-12-22 21:37:37

银虫 (小有名气)

两种选择，首先可以把引物的序列输入到oligo7软件，让它通过产物给你计算退火温度，当然这个工作用primer6也可以做
其次就是做个梯度，自己摸索

23楼2015-12-22 21:38:57

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

24楼2018-06-05 12:59:57

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