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i760912798

木虫 (正式写手)

[求助] PCR退火温度设定多少合适已有11人参与

我刚到拿到合成的引物,引物合成单上的一条引物的Tm值为54℃,一条引物Tm值为50℃,pcr退火温度设定多少合适?我想设定退火温度为53℃,不知道是否合适?
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gnot_nail

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我个人的经验设计引物tm一般是在60度左右(57-62看实际情况),同时两条引物tm相差不超过1度。PCR时先55度看有没有条带 效果如何,然后根据需要提高到60度,不过我一般都是直接60度pcr。当然要是没有什么经验的话 直接温度梯度。。。不过你设计的Tm50度个人觉得太低了。。而且误差了4度。
21楼2015-12-21 18:13:39
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个你做一个梯度pcr,摸一下退火温度,跑个胶看一下就行了

发自小木虫Android客户端
2楼2015-12-19 19:08:17
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
退火温度以TM值较小的为准,退火温度一般设为比TM值小5-10度,最佳温度得实验摸索。你这对我看设45度较合适。
生物科学
3楼2015-12-19 20:39:50
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yvonne9044

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-19 20:39:50
退火温度以TM值较小的为准,退火温度一般设为比TM值小5-10度,最佳温度得实验摸索。你这对我看设45度较合适。

45℃,你确定?

发自小木虫Android客户端
4楼2015-12-19 23:18:42
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