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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR退火温度设定多少合适
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i760912798

木虫 (正式写手)

[求助] PCR退火温度设定多少合适 已有11人参与

我刚到拿到合成的引物，引物合成单上的一条引物的Tm值为54℃，一条引物Tm值为50℃，pcr退火温度设定多少合适？我想设定退火温度为53℃，不知道是否合适？
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1楼 2015-12-19 18:59:28
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tuzkileon

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

两种选择，首先可以把引物的序列输入到oligo7软件，让它通过产物给你计算退火温度，当然这个工作用primer6也可以做
其次就是做个梯度，自己摸索
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23楼2015-12-22 21:38:57
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个你做一个梯度pcr，摸一下退火温度，跑个胶看一下就行了

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2楼2015-12-19 19:08:17
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
退火温度以TM值较小的为准，退火温度一般设为比TM值小5-10度，最佳温度得实验摸索。你这对我看设45度较合适。
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生物科学
3楼2015-12-19 20:39:50
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yvonne9044

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-19 20:39:50
退火温度以TM值较小的为准，退火温度一般设为比TM值小5-10度，最佳温度得实验摸索。你这对我看设45度较合适。

45℃，你确定？

发自小木虫Android客户端
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4楼2015-12-19 23:18:42
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