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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 使用M13F(-47)/M13R(-48)做菌落PCR，退火温度设定为多少啊？
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 使用M13F(-47)/M13R(-48)做菌落PCR，退火温度设定为多少啊？ 已有2人参与

我要做克隆，载体是pMD 19-T，准备用M13F(-47)/M13R(-48)做菌落PCR，看引物合成单上给出的Tm值分别是65.52/56.98。以前听说一对引物Tm值相差最好不要超过5，为什么这对查这么多，是正常的吗？另外，实际做PCR时，退火温度设定为多少合适呢？
有做过的高手 求指点
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越努力越幸运
1楼 2013-12-19 16:48:34
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-19 20:46:43
柠檬可乐星: 金币+3 2013-12-20 09:06:33
55度，58度 都可以 这个条件比较宽泛
赞一下 回复此楼
借你一生好不好
2楼2013-12-19 17:39:34
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+2 2013-12-20 09:06:36
同意楼上说法，55-62度范围任意一个温度均可作为退火温度，推荐58度
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-12-19 20:47:38
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贝壳儿BAY

铁虫 (初入文坛)
55-60都可以
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4楼2017-11-23 20:55:20
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