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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 高效液相色谱主峰峰纯度不为1.000
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wwjihec

铜虫 (初入文坛)

[求助] 高效液相色谱主峰峰纯度不为1.000已有3人参与

大家好，请教一个关于峰纯度的问题。我们公司新做的一个自主新药，开发有关物质方法时，选择的波长为260nm，而不是主峰最高吸收波长304nm。现在发现主峰纯度有时只有0.7左右，有时又有1.000.不管是正式批次样品还是强制降解样品都是如此。请问这是什么原因？
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1楼2015-12-16 13:32:42
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wangluo335

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
峰纯度和波长没有关系，应该是样品检测方法的分离度不够，杂质和主峰在一起出峰导致；检验具体可以看看峰纯度1.0和峰纯度0.7的图有何区别，最好看3D图，主峰附近有无小杂峰干扰
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wwjihec
2楼2015-12-16 13:39:55
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wwjihec

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangluo335 at 2015-12-16 13:39:55
峰纯度和波长没有关系，应该是样品检测方法的分离度不够，杂质和主峰在一起出峰导致；检验具体可以看看峰纯度1.0和峰纯度0.7的图有何区别，最好看3D图，主峰附近有无小杂峰干扰

谢谢你的回复，我们方法也用了304nm的波长，在该波长下峰纯度是可以的，而且同一个样品（比如对照）在不同时间进样，峰纯度也不相同。请问这又是什么原因呢？
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3楼2015-12-16 13:49:11
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wangluo335

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wwjihec: 金币+3, ★有帮助 2015-12-16 18:55:10
峰纯度的测定是出峰位置取不同阶段点进行全波长扫描，比较峰两侧的点和峰尖点吸收情况的差异得出的计算结果，和检测波长没有直接关系；
相同色谱条件下，同一样品反复检验，峰纯度值会有波动，但是一般数值比较稳定，不会有1.0和0.7这么大的偏差，我觉得是色谱条件还有待于进一步优化。
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4楼2015-12-16 15:24:46
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voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wwjihec: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-12-16 18:55:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by wwjihec at 2015-12-16 13:49:11
谢谢你的回复，我们方法也用了304nm的波长，在该波长下峰纯度是可以的，而且同一个样品（比如对照）在不同时间进样，峰纯度也不相同。请问这又是什么原因呢？...

不同波长范围下纯度可能不同，比如说260nm纯度低，360nm纯度高的可能性是有的。主峰里包杂质了，杂质只在220nm-250nm有吸收，而你设定的峰纯度波长范围是300nm-400nm，杂质就检测不到，峰自然是纯的，对于这样的情况，可以将波长范围调宽一点，比如200nm-400nm。对于设定同一波长范围（比如200-400nm）不同次进样，峰纯度不同，可能是主峰里有杂质，不同样品里杂质的量不同，或者是同一样品进样量差异，对于进样量少的，主峰里的杂质检测不到，峰纯度高，反之，峰纯度就低，对于这样的情况，你可以加大进样量，如果加大进样量后峰不纯了，说明主峰包杂质。峰纯度跟你选择的背景也有很大关系。
做有关物质方法时，波长的选择并非是API的最大吸收波长，须兼顾杂质的综合吸收波长。有关物质主要是做杂质检查的，应保证杂质峰的灵敏度。
以上仅代表个人的见解
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微信公众号：Pharmaguider（药事纵横），主页：www.pharmaguider.cn
5楼2015-12-16 15:25:04
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zongyuan

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以做LC-MS,如果你样品NMR图很干净，说明杂质很少，紫外提供的峰纯度可能是有问题的
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6楼2015-12-16 15:50:40
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wwjihec

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zongyuan at 2015-12-16 15:50:40
你可以做LC-MS,如果你样品NMR图很干净，说明杂质很少，紫外提供的峰纯度可能是有问题的

谢谢你的回复~~~~我们决定先排查其他原因，最后在打质谱。
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7楼2015-12-16 19:45:53
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suchang198

银虫 (小有名气)
峰纯度的计算是有一定限度的，峰面积若太大，超过其限定范围，计算出来的峰纯度就会不准确。你看看不同的纯度和峰面积间大小有没有什么关系。
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坚强面对生活
8楼2015-12-18 08:21:17
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wwjihec

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by suchang198 at 2015-12-18 08:21:17
峰纯度的计算是有一定限度的，峰面积若太大，超过其限定范围，计算出来的峰纯度就会不准确。你看看不同的纯度和峰面积间大小有没有什么关系。

谢谢你的回复，我们最后推导出来是因为柱子的填料批号不同导致的峰纯度，可能是由于色谱柱的该批填料不合格。
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9楼2015-12-19 12:35:32
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