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wwjihec

铜虫 (初入文坛)

[求助] 高效液相色谱主峰峰纯度不为1.000 已有3人参与

大家好,请教一个关于峰纯度的问题。我们公司新做的一个自主新药,开发有关物质方法时,选择的波长为260nm,而不是主峰最高吸收波长304nm。现在发现主峰纯度有时只有0.7左右,有时又有1.000.不管是正式批次样品还是强制降解样品都是如此。请问这是什么原因?
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wangluo335

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
峰纯度和波长没有关系,应该是样品检测方法的分离度不够,杂质和主峰在一起出峰导致;检验具体可以看看峰纯度1.0和峰纯度0.7的图有何区别,最好看3D图,主峰附近有无小杂峰干扰

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2015-12-16 13:39:55
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wwjihec

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangluo335 at 2015-12-16 13:39:55
峰纯度和波长没有关系,应该是样品检测方法的分离度不够,杂质和主峰在一起出峰导致;检验具体可以看看峰纯度1.0和峰纯度0.7的图有何区别,最好看3D图,主峰附近有无小杂峰干扰

谢谢你的回复,我们方法也用了304nm的波长,在该波长下峰纯度是可以的,而且同一个样品(比如对照)在不同时间进样,峰纯度也不相同。请问这又是什么原因呢?
3楼2015-12-16 13:49:11
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wangluo335

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
wwjihec: 金币+3, 有帮助 2015-12-16 18:55:10
峰纯度的测定是出峰位置取不同阶段点进行全波长扫描,比较峰两侧的点和峰尖点吸收情况的差异得出的计算结果,和检测波长没有直接关系;
相同色谱条件下,同一样品反复检验,峰纯度值会有波动,但是一般数值比较稳定,不会有1.0和0.7这么大的偏差,我觉得是色谱条件还有待于进一步优化。
4楼2015-12-16 15:24:46
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voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wwjihec: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-12-16 18:55:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by wwjihec at 2015-12-16 13:49:11
谢谢你的回复,我们方法也用了304nm的波长,在该波长下峰纯度是可以的,而且同一个样品(比如对照)在不同时间进样,峰纯度也不相同。请问这又是什么原因呢?...

不同波长范围下纯度可能不同,比如说260nm纯度低,360nm纯度高的可能性是有的。主峰里包杂质了,杂质只在220nm-250nm有吸收,而你设定的峰纯度波长范围是300nm-400nm,杂质就检测不到,峰自然是纯的,对于这样的情况,可以将波长范围调宽一点,比如200nm-400nm。对于设定同一波长范围(比如200-400nm)不同次进样,峰纯度不同,可能是主峰里有杂质,不同样品里杂质的量不同,或者是同一样品进样量差异,对于进样量少的,主峰里的杂质检测不到,峰纯度高,反之,峰纯度就低,对于这样的情况,你可以加大进样量,如果加大进样量后峰不纯了,说明主峰包杂质。峰纯度跟你选择的背景也有很大关系。
做有关物质方法时,波长的选择并非是API的最大吸收波长,须兼顾杂质的综合吸收波长。有关物质主要是做杂质检查的,应保证杂质峰的灵敏度。
以上仅代表个人的见解
微信公众号:Pharmaguider(药事纵横),主页:www.pharmaguider.cn
5楼2015-12-16 15:25:04
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zongyuan

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你可以做LC-MS,如果你样品NMR图很干净,说明杂质很少,紫外提供的峰纯度可能是有问题的
6楼2015-12-16 15:50:40
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wwjihec

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zongyuan at 2015-12-16 15:50:40
你可以做LC-MS,如果你样品NMR图很干净,说明杂质很少,紫外提供的峰纯度可能是有问题的

谢谢你的回复~~~~我们决定先排查其他原因,最后在打质谱。
7楼2015-12-16 19:45:53
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suchang198

银虫 (小有名气)

峰纯度的计算是有一定限度的,峰面积若太大,超过其限定范围,计算出来的峰纯度就会不准确。你看看不同的纯度和峰面积间大小有没有什么关系。
坚强面对生活
8楼2015-12-18 08:21:17
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wwjihec

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by suchang198 at 2015-12-18 08:21:17
峰纯度的计算是有一定限度的,峰面积若太大,超过其限定范围,计算出来的峰纯度就会不准确。你看看不同的纯度和峰面积间大小有没有什么关系。

谢谢你的回复,我们最后推导出来是因为柱子的填料批号不同导致的峰纯度,可能是由于色谱柱的该批填料不合格。
9楼2015-12-19 12:35:32
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