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LIVESOCCER

金虫 (正式写手)

[求助] SOD活性测定的问题

我最近测叶片里面SOD活性。SOD活性,之前做的不少,但是这次非常奇怪,照光后样品管子比对照管子还要蓝。光照强度也都是均一的,我用对照管在各个位置都试过。因此,我怀疑是提取液的问题,可能加入能与NBT显色的物质,提取液是磷酸缓冲液加了1mMEDTA,0.25%triton(吐温)和2%的PVP,我查了查这三个试剂与NBT都不反应啊!
  真是第一次遇到这种情况,也很想不通,最多样品管活性低的话也就和对照管颜色差不多,但是样品管颜色还深!我真想不通了,不可能是样品本身含有干扰物质啊!
大家帮我分析分析吧!
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pandezhuo

银虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
酶提取有问题,应该是酶失活了

发自小木虫Android客户端
5楼2015-12-27 14:01:47
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单音节的秋

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我是用邻苯三酚自氧化法,和你一样,加入酶提取液不但没有抑制,反而促进反应。求楼主得到答案后告知,跪谢!
2楼2015-12-21 20:22:33
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macjr

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
试剂(酶)        用量/ml        终浓度/比色时
0.05mol/L磷酸缓冲液        1.5       
130mmol/L Met溶液        0.3        13mmol/L
750μmol/L NBT溶液        0.3        75μmol/L
100μmol/L EDTA-Na2液        0.3        10μmol/L
20μmol/L核黄素        0.3        2.0μmol/L
酶液        0.05        2支对照管以缓冲液代替酶液
蒸馏水        0.25       
总体积        3.0       
我做的是用这个方法
3楼2015-12-27 08:55:51
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董玉锋earth

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我前段时间也测SOD酶活性了,和楼主方法一样。也遇到上面的问题,我们初步怀疑是温度控制的问题。
4楼2015-12-27 10:40:37
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