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eagle00768

木虫 (小有名气)

[求助] EMSA电泳的问题 已有3人参与

如图，为何自由探针总是不在一个水平线？跑了好多次了，总是这个结果，不知道是什么原因造成的。另：非变性胶用什么蛋白marker比较好？求推荐！

EMSA电泳的问题
图片1.png
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1楼 2015-12-05 13:21:37
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刘芬玲

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
eagle00768: 金币+1, ★有帮助 2015-12-08 20:11:01
会不会是胶的问题，还有电泳时的电压？？
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2楼2015-12-08 14:43:21
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eagle00768

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 刘芬玲 at 2015-12-08 14:43:21
会不会是胶的问题，还有电泳时的电压？？

谢谢这位同学的意见！嗯，有考虑过这个问题，期间有用过含甘油和不含甘油的6%非变性胶，都出现了这种情况。楼主一直用100V预电泳一个小时左右然后用100V跑1个半小时左右，不知道是不是电压太大，打算下次实验调整下电压。

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3楼2015-12-08 14:55:31
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陈爱中

新虫 (小有名气)
询问一下楼主，你在蛋白和核酸孵育好以后，是直接上样的还是固定处理以后在上样的？
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4楼2015-12-08 15:55:22
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eagle00768

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 陈爱中 at 2015-12-08 15:55:22
询问一下楼主，你在蛋白和核酸孵育好以后，是直接上样的还是固定处理以后在上样的？

按照说明书说明加了试剂盒提供的loading buffer以后用枪头混匀然后上样的。不知道您指的固定是？

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5楼2015-12-08 18:29:50
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Lamar@

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

您好，我也遇到了这个问题，您能分享一下解决办法吗？

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6楼2020-10-04 22:02:58
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木桃夹子

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我之前也存在这样的问题，应该就是胶凝固的不均匀的问题，加入APS前要超声10min，然后我是放在温水中迅速加入制胶板应该好一点
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7楼2021-12-13 23:00:52
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