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EMSA技术 已有1人参与
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从去年开始做EMSA，有成功的，有做不出来的，最近几次做的效果一直不好。。。 我用的是赛默飞的EMSA试剂盒，biotin探针试剂盒也是赛默飞的，抽核蛋白也是赛默飞的kit，最近做出来的都是只有引物带没有binding？？ 1 我用的是4%的非变性凝胶 2 反应体系里面把试剂盒给出的optional的都加了 50%甘油 1ul 1%NP40 1ul 1M KCL 1ul 100mM Mgcl2 。。 200mM EDTA 。。 dI.dC。。 DTT 。。 10*binding buffer 2ul biotin-DNA 2ul 核蛋白 5ug 20ul体系 室温30min 电泳 3 电泳 100v 溴酚蓝到底 4 转膜 380mA 60min 剩下的操作都是和试剂盒中一样，但就是只有游离探针的带。。。  哪里会有问题呢？ ps这个探针以前用过，可以binding下来的 [ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:32 ] |
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2楼2014-01-15 20:48:37