[交流] EMSA技术 已有1人参与

从去年开始做EMSA，有成功的，有做不出来的，最近几次做的效果一直不好。。。     我用的是赛默飞的EMSA试剂盒，biotin探针试剂盒也是赛默飞的，抽核蛋白也是赛默飞的kit，最近做出来的都是只有引物带没有binding？？ 1 我用的是4%的非变性凝胶 2 反应体系里面把试剂盒给出的optional的都加了    50%甘油   1ul    1%NP40    1ul     1M KCL      1ul     100mM Mgcl2    。。     200mM EDTA   。。      dI.dC。。      DTT  。。     10*binding buffer  2ul     biotin-DNA   2ul     核蛋白   5ug    20ul体系 室温30min 电泳 3 电泳 100v 溴酚蓝到底 4 转膜 380mA 60min 剩下的操作都是和试剂盒中一样，但就是只有游离探针的带。。。 哪里会有问题呢？ ps这个探针以前用过，可以binding下来的 [ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:32 ]

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