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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白非变性胶电泳
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lnhxsh

新虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白非变性胶电泳 已有6人参与

请教各位大神一个问题，刚开始做非变性胶电泳，做了几次了，marker条带基本上都是弥散的。主条带也不是SDS-PAGE中那样的齐整，跟订书钉子一样，样品处理温和，只是加了loading buffer处理一下，不过没有离心，所以在浓缩胶和分离胶界限处出现的细小条带可能是堆积的样品。电泳条件是80V和120V，溴酚蓝完全跑出了玻璃板，marker起不到指示作用，就是看胶的质量是否过关。如图所示。各位大神能不能给点参考意见？谢谢。

蛋白非变性胶电泳
native gel-3.jpg


蛋白非变性胶电泳-1
native gel-1.jpg
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1楼 2015-11-27 14:47:28
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huang521

银虫 (小有名气)
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虽然我不知道你的为什么这样，但你说的那两家公司我都有问，他们并没有native的marker，我最后是在thermofisher买的一个分子量范围超宽的，不过跑出来感觉还可以～

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6楼2015-12-02 22:14:39
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普通回帖

huang521

银虫 (小有名气)
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想问楼主的marker分子量范围是多少，在哪个公司买的，谢谢啦～

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2楼2015-11-28 09:31:03
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
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3楼2015-11-28 23:58:09
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lnhxsh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huang521 at 2015-11-28 09:31:03
想问楼主的marker分子量范围是多少，在哪个公司买的，谢谢啦～

同事买的，BIO-RAD公司的，宽分子量的，10-250 kDa，十条带。不过还是推荐我以前用的，fermentas的预染marker，10-170 kDa，十条带。
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4楼2015-12-02 21:20:57
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lnhxsh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mataomatao at 2015-11-28 23:58:09
菜鸟，没有理解非变性的精髓

我的确是菜鸟，所以想请教你一下。谢谢。
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5楼2015-12-02 21:21:37
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eagle00768

木虫 (小有名气)
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非变性胶还有浓缩胶？

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7楼2015-12-02 22:23:28
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alicelchf

木虫 (著名写手)
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你样品处理过不能算native了吧

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修身、齐家、治国、平天下
8楼2015-12-02 22:32:32
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eagle00768

木虫 (小有名气)
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我想请教下如果不加浓缩胶会有什么影响？谢谢～

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9楼2015-12-02 22:41:20
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lnhxsh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by eagle00768 at 2015-12-02 22:23:28
非变性胶还有浓缩胶？

不加浓缩胶也做过，但是什么都看不见。
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10楼2015-12-03 08:55:43
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