【答案】应助回帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

求高人指点qpcr问题，扩增效率太高！已经有14人回复

1楼2015-11-05 11:00:13

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

二月smile

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 163.8
帖子: 46
在线: 36.4小时
虫号: 3754835
注册: 2015-03-21
性别: MM
专业: 环境微生物学

是质粒没有稀释开吗？

赞一下(1人)

2楼2015-11-05 15:26:52

wjf7862203

铁虫 (小有名气)

应助: 9 (幼儿园)
金币: 1634.9
散金: 1
红花: 1
帖子: 81
在线: 36.4小时
虫号: 1169295
注册: 2010-12-13
性别: GG
专业: 基础兽医学

引用回帖:

5楼: Originally posted by 二月smile at 2015-11-05 16:32:36
楼主，我还想问一个问题。我样品的平行间也不好，是有些基因本身就不好稀释混匀吗？还是其他原因。...

基因连到质粒，质粒作为阳性模板，一般都可以稀释开的，我一般一直稀释到10的1次方，还有质粒比较容易污染，稀释时要注意，

发自小木虫Android客户端

赞一下(1人)

9楼2015-11-05 19:16:05

普通回帖

二月smile

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 163.8
帖子: 46
在线: 36.4小时
虫号: 3754835
注册: 2015-03-21
性别: MM
专业: 环境微生物学

在线等，急啊。导师快没耐心了，跟样品一起做了两次失败了，然后做标曲，又失败了。浪费了很多药品，还是没找到原因，不敢再试了。大神们，快快帮帮我。

3楼2015-11-05 15:32:42

wjf7862203

铁虫 (小有名气)

应助: 9 (幼儿园)
金币: 1634.9
散金: 1
红花: 1
帖子: 81
在线: 36.4小时
虫号: 1169295
注册: 2010-12-13
性别: GG
专业: 基础兽医学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
二月smile: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-11-05 16:41:50

没有稀释好，标准曲线，稀释很关键，稀释好就是成功一半了。1ul+9ul稀释很不好稀释，量太少了，建议你加大稀释体积20ul+180ul。稀释时注意混匀，枪头用进口的吸的准一些，稀释液可以考虑用TE

发自小木虫Android客户端

4楼2015-11-05 15:59:22

二月smile

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 163.8
帖子: 46
在线: 36.4小时
虫号: 3754835
注册: 2015-03-21
性别: MM
专业: 环境微生物学

引用回帖:

4楼: Originally posted by wjf7862203 at 2015-11-05 15:59:22
没有稀释好，标准曲线，稀释很关键，稀释好就是成功一半了。1ul+9ul稀释很不好稀释，量太少了，建议你加大稀释体积20ul+180ul。稀释时注意混匀，枪头用进口的吸的准一些，稀释液可以考虑用TE
...

楼主，我还想问一个问题。我样品的平行间也不好，是有些基因本身就不好稀释混匀吗？还是其他原因。

5楼2015-11-05 16:32:36

二月smile

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 163.8
帖子: 46
在线: 36.4小时
虫号: 3754835
注册: 2015-03-21
性别: MM
专业: 环境微生物学

引用回帖:

我的质粒是10次方，有人建议我，1到1000稀释到7次方，然后100到1000逐级稀释6-3次方。这样可行吗？

6楼2015-11-05 16:36:19

upgo123

金虫 (小有名气)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 1038.4
散金: 605
红花: 4
帖子: 222
在线: 51.3小时
虫号: 2250006
注册: 2013-01-19
性别: GG
专业: 教育学

我们做标曲是将模板稀释若干个梯度：-1、-2、-3、-4、-5、-6、-7、-8；取-3、-4、-5、-6四个梯度，两个平行做标曲，结果还可以，高浓度模板的CT值在18左右。不过我们用的染料是SYBR GREEN，不知道FAM是否适用。
另外，看你的扩增CT值还不低，是不是模板浓度本身就高，要不你以100为梯度稀释试试看