应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 标曲溶解曲线单一峰，但梯度稀释后，Ct值基本无差别，线性很差，扩增效率高的吓人
281/3返回列表123下一页
查看: 2877  |  回复: 27
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

二月smile

新虫 (初入文坛)

[求助] 标曲溶解曲线单一峰，但梯度稀释后，Ct值基本无差别，线性很差，扩增效率高的吓人 已有1人参与

如图，不知道是怎么回事啊，理论上，不同梯度的浓度的质粒的Ct值是有差别的，可以分开的啊。我做的另一个基因是可以分开的，为什么这个的Ct值都在一起呢。我是按1ul+9ul稀释的。扩增条件是：94℃预变性4min，45个循环为94℃变性45s，61℃退火45s,72℃延1min，最后再在72℃延伸20min。体系是：引物10uM各 1ul，mix12.5，双蒸水10，模板1ul（10ng/ul）.    新手求助！急！！急！！急！！

标曲溶解曲线单一峰，但梯度稀释后，Ct值基本无差别，线性很差，扩增效率高的吓人
1.png


标曲溶解曲线单一峰，但梯度稀释后，Ct值基本无差别，线性很差，扩增效率高的吓人-1
2.png


标曲溶解曲线单一峰，但梯度稀释后，Ct值基本无差别，线性很差，扩增效率高的吓人-2
3.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-11-05 11:00:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

二月smile

新虫 (初入文坛)
是质粒没有稀释开吗？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-11-05 15:26:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjf7862203

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 二月smile at 2015-11-05 16:32:36
楼主，我还想问一个问题。我样品的平行间也不好，是有些基因本身就不好稀释混匀吗？还是其他原因。...

基因连到质粒，质粒作为阳性模板，一般都可以稀释开的，我一般一直稀释到10的1次方，还有质粒比较容易污染，稀释时要注意，

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2015-11-05 19:16:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

二月smile

新虫 (初入文坛)
在线等，急啊。导师快没耐心了，跟样品一起做了两次失败了，然后做标曲，又失败了。浪费了很多药品，还是没找到原因，不敢再试了。大神们，快快帮帮我。
赞一下 回复此楼
3楼2015-11-05 15:32:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjf7862203

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
二月smile: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-11-05 16:41:50
没有稀释好，标准曲线，稀释很关键，稀释好就是成功一半了。1ul+9ul稀释很不好稀释，量太少了，建议你加大稀释体积20ul+180ul。稀释时注意混匀，枪头用进口的吸的准一些，稀释液可以考虑用TE

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2015-11-05 15:59:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

二月smile

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wjf7862203 at 2015-11-05 15:59:22
没有稀释好，标准曲线，稀释很关键，稀释好就是成功一半了。1ul+9ul稀释很不好稀释，量太少了，建议你加大稀释体积20ul+180ul。稀释时注意混匀，枪头用进口的吸的准一些，稀释液可以考虑用TE
...

楼主，我还想问一个问题。我样品的平行间也不好，是有些基因本身就不好稀释混匀吗？还是其他原因。
赞一下 回复此楼
5楼2015-11-05 16:32:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

二月smile

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wjf7862203 at 2015-11-05 15:59:22
没有稀释好，标准曲线，稀释很关键，稀释好就是成功一半了。1ul+9ul稀释很不好稀释，量太少了，建议你加大稀释体积20ul+180ul。稀释时注意混匀，枪头用进口的吸的准一些，稀释液可以考虑用TE
...

我的质粒是10次方，有人建议我，1到1000稀释到7次方，然后100到1000逐级稀释6-3次方。这样可行吗？
赞一下 回复此楼
6楼2015-11-05 16:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

upgo123

金虫 (小有名气)
我们做标曲是将模板稀释若干个梯度：-1、-2、-3、-4、-5、-6、-7、-8；取-3、-4、-5、-6四个梯度，两个平行做标曲，结果还可以，高浓度模板的CT值在18左右。不过我们用的染料是SYBR GREEN，不知道FAM是否适用。
另外，看你的扩增CT值还不低，是不是模板浓度本身就高，要不你以100为梯度稀释试试看
赞一下 回复此楼
选择，然后坚持
7楼2015-11-05 16:48:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

许彦

木虫 (正式写手)
会不会存在强阳污染的问题，有没有阴性对照

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2015-11-05 17:04:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjf7862203

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 二月smile at 2015-11-05 16:36:19
我的质粒是10次方，有人建议我，1到1000稀释到7次方，然后100到1000逐级稀释6-3次方。这样可行吗？...

我一般在灵敏度的时候随便把标准曲线给做了，标准曲线一般取5个稀释度，10的2，3,4,5,6次方,

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2015-11-05 19:20:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 二月smile 的主题更新
281/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:14 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-15 07:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:49 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:14 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 05:34 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:26 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:13 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:57 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 18:01 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭