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标曲溶解曲线单一峰，但梯度稀释后，Ct值基本无差别，线性很差，扩增效率高的吓人 已有1人参与
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如图，不知道是怎么回事啊，理论上，不同梯度的浓度的质粒的Ct值是有差别的，可以分开的啊。我做的另一个基因是可以分开的，为什么这个的Ct值都在一起呢。我是按1ul+9ul稀释的。扩增条件是：94℃预变性4min，45个循环为94℃变性45s，61℃退火45s,72℃延1min，最后再在72℃延伸20min。体系是：引物10uM各 1ul，mix12.5，双蒸水10，模板1ul（10ng/ul）. 新手求助！急！！急！！急！！ 1.png  2.png  3.png |
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7楼2015-11-05 16:48:12
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wjf7862203
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
二月smile: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-11-05 16:41:50
感谢参与，应助指数 +1
二月smile: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-11-05 16:41:50
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没有稀释好，标准曲线，稀释很关键，稀释好就是成功一半了。1ul+9ul稀释很不好稀释，量太少了，建议你加大稀释体积20ul+180ul。稀释时注意混匀，枪头用进口的吸的准一些，稀释液可以考虑用TE 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-11-05 15:59:22
