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xiaochen9002

新虫 (小有名气)

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[求助] 蛋白纯化不出来…… 已有6人参与

手上有一个蛋白，大肠表达后镍柱纯化，得到了目的条带，但是还有三条杂带，估计是截短表达的蛋白。目前已经用了好多方法去除杂带，50KDa的超滤管，阴阳离子交换柱以及分子筛，都没分开，不知道各位有什么好的方法没？实在快疯了，

电泳图附上，红色的是我要的条带，静候各位大牛的解答！

效果图.png

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1楼 2015-10-28 15:49:15

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总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

6楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-10-28 17:32:12
关于超滤管的问题，我已经问公司了，他们说50KDa的超滤管是保证50KDa以上的蛋白不掉下来，其他的不保证，看来是行不通了。分子筛用的是superdex-75，1m左右。具体的柱效没有评估，不知道是不是柱效的问题。...

Superdex 75分子筛纯化两种蛋白的分子量相差至少2-3倍，所以楼主的蛋白应该无法用Superdex 75进行分离纯化。