24小时热门版块排行榜    

查看: 2889  |  回复: 38
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xiaochen9002

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化不出来…… 已有6人参与

手上有一个蛋白,大肠表达后镍柱纯化,得到了目的条带,但是还有三条杂带,估计是截短表达的蛋白。目前已经用了好多方法去除杂带,50KDa的超滤管,阴阳离子交换柱以及分子筛,都没分开,不知道各位有什么好的方法没?实在快疯了,  电泳图附上,红色的是我要的条带,静候各位大牛的解答!

蛋白纯化不出来……
效果图.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaochen9002

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2015-10-28 16:26:44
分子量看起来差了不少,分子筛一点效果都没有?超滤管一般达不到那么好的纯化效果的。实在不行重新构建吧~

分子筛只用过一次,从电泳图上看不出显著地纯化效果。是不是优化下条件就可以了?
3楼2015-10-28 16:42:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 39 个回答

a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
分子量看起来差了不少,分子筛一点效果都没有?超滤管一般达不到那么好的纯化效果的。实在不行重新构建吧~
2楼2015-10-28 16:26:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a86052

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaochen9002 at 2015-10-28 16:42:33
分子筛只用过一次,从电泳图上看不出显著地纯化效果。是不是优化下条件就可以了?...

不一定的,因为你既然从电泳图上看不出纯化效果,也许过分子筛并不能达到要求。如果像你说的,这些是截短表达,那么构建个C端标签的也许会更好。你可以先检测下是不是截短的蛋白
4楼2015-10-28 16:56:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

总有二狗咬朕

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
通常使用超滤来纯化蛋白是,其应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为61kDa,就可以选择20kDa截留分子量的超滤管,所以用55kDa不行;阴阳离子交换柱没分开,说明纯化的重组蛋白与杂蛋白PI接近。但是分子筛应该是可以分得开的,可能楼主的柱效不高,用标准试剂走着看一下,是否能达到应用的要求。还有看看楼主的填料,可能选择的不好,范围太宽了。
我好累,承受这个年纪不该有的帅!
5楼2015-10-28 16:59:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见