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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 设计的PCR 引物碱基数量差异较大可以p出我的目的条带吗
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你我同行1992

铁虫 (初入文坛)

[求助] 设计的PCR 引物碱基数量差异较大可以p出我的目的条带吗 已有3人参与

pcr引物碱基数量相差较大，上引有100bp（真正用于结合的也就20bp，其余是我需要加在基因前面的序列，全部设计在上引），下引物也就是正常的20bp左右，这样的一对引物以质粒为模版可以p下我的目的条带吗？求大神指导
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1楼 2015-10-23 17:14:44
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tolobio

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止网站推广广告 2015-10-25 09:58:14
本帖内容被屏蔽
2楼2015-10-23 18:00:58
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你我同行1992

铁虫 (初入文坛)
顶一下
3楼2015-10-23 18:39:50
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品茗听雨0530

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
恐怕不行，上下游引物退火温度会差很大
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4楼2015-10-25 22:02:13
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睫毛下de微笑

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上下游引物应该tm值不能差太多。

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5楼2015-10-25 22:10:04
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睫毛下de微笑

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 睫毛下de微笑 at 2015-10-25 22:10:04
上下游引物应该tm值不能差太多。

并且gc含量不能太高。

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6楼2015-10-25 22:10:44
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75722428

新虫 (初入文坛)
同问同问，我也正要做这个
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7楼2015-10-30 13:36:50
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jianguochen

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是可以做到的。选用一些酶的buffer可以扩大退火温度范围。这个有点类似PCR加接头，只不过没有你这么长。如果不行可以考虑用多对引物逐步的加长。
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8楼2015-10-30 16:43:03
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