24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3878)
>文献求助 (386)
>虫友互识 (369)
>导师招生 (354)
>硕博家园 (111)
>休闲灌水 (103)
>博后之家 (94)
>招聘信息布告栏 (92)
>论文投稿 (92)
>考博 (80)
>催化 (57)
>公派出国 (54)
>基金申请 (48)
>考研 (47)
>论文道贺祈福 (43)
>教师之家 (41)

返回列表

如果如愿

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 5
帖子: 2
在线: 3.2小时
虫号: 3074903
注册: 2014-03-20

[求助] 高保真酶扩出目的基因后，如何高效加尾（最好提供加尾体系）已有1人参与

最近用用高保真酶扩增目的片段，然后加A，但是一直连接不上T载体，都快急死了，求各位大神帮忙！（希望提供加尾体系），谢谢了
我的具体做法是：高保真酶（全式金公司）扩增后，跑电泳，琼脂糖凝胶回收，回收后用takara公司的Taq酶加尾，然后采用两种方法回收，一种方法是跑电泳，凝胶回收，另一种方法直接纯化，这两种方法我都做过，但是都不出结果连接不上。

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

基因组DNA为模板进行PCR，第一次扩出来了，后面怎么重复都不行。已经有34人回复
关于GatewayBP反应的很多问题——劳烦各位牛人已经有23人回复
为什么我扩出的鸡绝缘子（chicken beta-globin insulator）条带不明显已经有0人回复
【专题】PCR实验技术指南已经有535人回复

1楼 2015-10-22 16:07:59

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

tolobio

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:05:42

本帖内容被屏蔽

2楼2015-10-22 16:29:07

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 154 (高中生)
金币: 2277.4
散金: 100
红花: 29
帖子: 464
在线: 119.4小时
虫号: 2621902
注册: 2013-08-28
专业: 细胞物质运输

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
如果如愿: 金币+4, ★★★很有帮助 2015-10-24 10:38:00
如果如愿: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-10-24 10:40:22

人品好的时候怎么连都连得上，不好的时候折腾死也连不上。。这是我的经验。

我人品差到爆的时候，选择用平端连接了，于是就连上了。虽然效率低很多，长出来的克隆数少，但是总是有的，阳性率也高。推荐你试试。

我把平端载体环化做成了plasmid，需要的话找我换或者购买。151354061

赞一下(1人)

回复此楼

3楼2015-10-23 03:29:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

如果如愿

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 5
帖子: 2
在线: 3.2小时
虫号: 3074903
注册: 2014-03-20

引用回帖:

3楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2015-10-23 03:29:04
人品好的时候怎么连都连得上，不好的时候折腾死也连不上。。这是我的经验。

我人品差到爆的时候，选择用平端连接了，于是就连上了。虽然效率低很多，长出来的克隆数少，但是总是有的，阳性率也高。推荐你试试。
...

看来我人品也很差呀，你是用平末端的T载体吗？之前有个公司推荐我用，我没试过。

赞一下

回复此楼

4楼2015-10-23 11:19:47

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖