应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 高保真酶扩出目的基因后，如何高效加尾（最好提供加尾体系）
51/1返回列表
查看: 3888  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

如果如愿

新虫 (初入文坛)

[求助] 高保真酶扩出目的基因后，如何高效加尾（最好提供加尾体系） 已有1人参与

最近用用高保真酶扩增目的片段，然后加A，但是一直连接不上T载体，都快急死了，求各位大神帮忙！（希望提供加尾体系），谢谢了
我的具体做法是：高保真酶（全式金公司）扩增后，跑电泳，琼脂糖凝胶回收，回收后用takara公司的Taq酶加尾，然后采用两种方法回收，一种方法是跑电泳，凝胶回收，另一种方法直接纯化，这两种方法我都做过，但是都不出结果连接不上。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-10-22 16:07:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宋宋6

新虫 (初入文坛)
我蓝白斑筛选，能长菌，长的还不少，菌液pcr就是没有目的带。。关键坑人的是引物居然能和载体序列匹配的差不多，快郁闷死了。。。。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2015-12-23 19:22:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

tolobio

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 禁止回帖广告 2015-10-25 10:05:42
本帖内容被屏蔽
2楼2015-10-22 16:29:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
如果如愿: 金币+4, ★★★很有帮助 2015-10-24 10:38:00
如果如愿: 金币+1, ★★★很有帮助 2015-10-24 10:40:22
人品好的时候怎么连都连得上，不好的时候折腾死也连不上。。这是我的经验。

我人品差到爆的时候，选择用平端连接了，于是就连上了。虽然效率低很多，长出来的克隆数少，但是总是有的，阳性率也高。推荐你试试。

我把平端载体环化做成了plasmid，需要的话找我换或者购买。151354061
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-10-23 03:29:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

如果如愿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2015-10-23 03:29:04
人品好的时候怎么连都连得上，不好的时候折腾死也连不上。。这是我的经验。

我人品差到爆的时候，选择用平端连接了，于是就连上了。虽然效率低很多，长出来的克隆数少，但是总是有的，阳性率也高。推荐你试试。
...

看来我人品也很差呀，你是用平末端的T载体吗？之前有个公司推荐我用，我没试过。
赞一下 回复此楼
4楼2015-10-23 11:19:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +17 angus9576 2026-08-25 21/1050 2026-08-25 22:39 by 悠悠美女
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 有没有大神帮我看看基金代码 28+4 1234567wang 2026-08-24 10/500 2026-08-25 19:15 by lfy8008
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +20 羊腰板 2026-08-21 23/1150 2026-08-25 16:34 by zsna
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭