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关于荧光定量PCR 标准曲线的问题 已有1人参与
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我用绝对定量的 qPCR 测定某个基因A在土壤样品中的copy数目 查了好多文献，大都是：采用还有这个A基因的单拷贝质粒DNA进行标准曲线的制备，将其稀释到一定倍数， 这里产生了疑问 1）为什么要构建含A基因的单拷贝质粒 2）直接利用A基因的PCR产物进行目的片段浓度确定，再转换成copies/ul等形式，不可以吗？？为什么？？ |
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2楼2015-10-20 09:28:39
高gaoeryang
银虫 (小有名气)
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- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
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楼上完全正确。此外 pcr 产物做模版，扩增效率没有质粒高，有时可能卡在70%再上不去了。因为引物anneal到质粒上的概率要高于pcr 片段，因为pcr两端再无其他序列可target。 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2015-10-26 00:11:27
5楼2017-11-22 10:25:32
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