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changmaster

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量pcr相关 已有1人参与

本人前期是做高通量测序的，现在要对测序结果进行分析验证。取了处理的4个时间点做荧光定量pcr验证，不知道每个时间点的样要不要做重复，取4个时间点合适不，会不会少了？还请各位大神不吝赐教
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做自己，不试图成为任何人
1楼 2015-10-19 08:58:29
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tolobio

新虫 (小有名气)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
这里要看实验需求以及国际上一般这类处理要分多长时间出差异（每个点具体代表了处理的不同阶段？）。
每个点肯定要做3个生物学重复的（不是一个样本做三次qPCR）。

我们也提供服务，供参考：http://www.tolobio.com/service.php
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2楼2015-10-19 12:42:55
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changmaster

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tolobio at 2015-10-19 12:42:55
这里要看实验需求以及国际上一般这类处理要分多长时间出差异（每个点具体代表了处理的不同阶段？）。
每个点肯定要做3个生物学重复的（不是一个样本做三次qPCR）。

我们也提供服务，供参考：http://www.tolobio ...

每个点做3个生物学重复，是指每个时间点要提3次RNA，做定量，还是每个时间点提一次RNA，做定量时点3次呢？
如果外包给公司做，4个样，每个样20个基因，多少钱呢？
希望一一解答，不胜感激
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做自己，不试图成为任何人
3楼2015-10-19 16:47:26
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971435258

新虫 (初入文坛)
我也是要验证高通量测序结果，不知道怎么做
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4楼2015-10-19 18:34:46
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
每个时间点都要做生物学重复，此外每个生物学重复还最好做一遍技术重复，就是拿同样的样品跑两遍qPCR反应。
这样看起来要做很多重复，但是没办法。对于表达比较低的基因，有时候qPCR的误差就是很大，而且偶尔有的孔跑的循环数莫名其妙。qPCR本身是对数形式，所以如果差异只有20%-30%，循环数变化很小，必须要做显著性分析
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
5楼2015-10-20 04:15:30
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