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changmaster

新虫 (小有名气)

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[求助] 荧光定量pcr相关已有1人参与

本人前期是做高通量测序的，现在要对测序结果进行分析验证。取了处理的4个时间点做荧光定量pcr验证，不知道每个时间点的样要不要做重复，取4个时间点合适不，会不会少了？还请各位大神不吝赐教

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做自己，不试图成为任何人

1楼 2015-10-19 08:58:29

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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

每个时间点都要做生物学重复，此外每个生物学重复还最好做一遍技术重复，就是拿同样的样品跑两遍qPCR反应。
这样看起来要做很多重复，但是没办法。对于表达比较低的基因，有时候qPCR的误差就是很大，而且偶尔有的孔跑的循环数莫名其妙。qPCR本身是对数形式，所以如果差异只有20%-30%，循环数变化很小，必须要做显著性分析

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