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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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changmaster

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量pcr相关 已有1人参与

本人前期是做高通量测序的,现在要对测序结果进行分析验证。取了处理的4个时间点做荧光定量pcr验证,不知道每个时间点的样要不要做重复,取4个时间点合适不,会不会少了?还请各位大神不吝赐教
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做自己,不试图成为任何人
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tolobio

新虫 (小有名气)


商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
这里要看实验需求以及国际上一般这类处理要分多长时间出差异(每个点具体代表了处理的不同阶段?)。
每个点肯定要做3个生物学重复的(不是一个样本做三次qPCR)。

我们也提供服务,供参考:http://www.tolobio.com/service.php
2楼2015-10-19 12:42:55
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changmaster

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tolobio at 2015-10-19 12:42:55
这里要看实验需求以及国际上一般这类处理要分多长时间出差异(每个点具体代表了处理的不同阶段?)。
每个点肯定要做3个生物学重复的(不是一个样本做三次qPCR)。

我们也提供服务,供参考:http://www.tolobio ...

每个点做3个生物学重复,是指每个时间点要提3次RNA,做定量,还是每个时间点提一次RNA,做定量时点3次呢?
如果外包给公司做,4个样,每个样20个基因,多少钱呢?
希望一一解答,不胜感激
做自己,不试图成为任何人
3楼2015-10-19 16:47:26
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971435258

新虫 (初入文坛)

我也是要验证高通量测序结果,不知道怎么做
4楼2015-10-19 18:34:46
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
每个时间点都要做生物学重复,此外每个生物学重复还最好做一遍技术重复,就是拿同样的样品跑两遍qPCR反应。
这样看起来要做很多重复,但是没办法。对于表达比较低的基因,有时候qPCR的误差就是很大,而且偶尔有的孔跑的循环数莫名其妙。qPCR本身是对数形式,所以如果差异只有20%-30%,循环数变化很小,必须要做显著性分析
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
5楼2015-10-20 04:15:30
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