24小时热门版块排行榜    

查看: 1439  |  回复: 9

沙海林空

木虫 (正式写手)

[求助] 关于质粒提取遇到的问题 已有5人参与

我想用大肠杆菌来进行质粒的抽提,但我首先需要让质粒在大肠杆菌体内产生,
请问通常是用什么办法把原先的质粒导入到细菌体内?
生物小白,希望各位高手帮忙
谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

Die-Luft-der-Freiheit-weht.
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
沙海林空: 金币+5 2015-09-16 19:25:33
利用大肠杆菌感受态细胞,可以将质粒导入到其中,一般常用DH5α感受态,导入方法常用的有,电转,和化转,在网上应该可以搜到
2楼2015-09-16 10:12:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ASWDR

金虫 (小有名气)

比较简单的可以用钙离子溶液处理,制备感受态细胞,再转质粒进去

发自小木虫Android客户端
3楼2015-09-16 10:17:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syhzlsd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
沙海林空: 金币+5 2015-09-16 19:25:21
用感受态细胞直接转化质粒就可以了!
4楼2015-09-16 10:44:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenllili

铜虫 (正式写手)

去一个做基因工程方面的实验室看一下就好了,这都是很成熟的实验流程了。你自己摸索的话,纯属耗时间。

发自小木虫Android客户端
5楼2015-09-16 12:41:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

learningying

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
沙海林空: 金币+10, 有帮助 2015-09-16 19:24:56
那么多金币都不给我们发放啊。流程:提取质粒——转化(热激法转化,或者电穿孔法)——涂布平板,挑选克笼子——验证——大量摇菌——提取质粒——其他实验用。
加油,天道酬勤
6楼2015-09-16 15:59:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沙海林空

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by learningying at 2015-09-16 15:59:28
那么多金币都不给我们发放啊。流程:提取质粒——转化(热激法转化,或者电穿孔法)——涂布平板,挑选克笼子——验证——大量摇菌——提取质粒——其他实验用。

谢谢,我了解了一下,只需要直接将质粒加入到细菌培养液中就行。
Die-Luft-der-Freiheit-weht.
7楼2015-09-16 19:24:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

learningying

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 沙海林空 at 2015-09-16 19:24:58
谢谢,我了解了一下,只需要直接将质粒加入到细菌培养液中就行。...

是这样子,但是要注意那个菌液是感受态细胞,不然你转化不出来的。。。

发自小木虫Android客户端
加油,天道酬勤
8楼2015-09-16 20:30:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

兰兰园丁

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
沙海林空: 金币+15, ★★★很有帮助, 多谢 2015-09-17 19:19:11
引用回帖:
7楼: Originally posted by 沙海林空 at 2015-09-16 19:24:58
谢谢,我了解了一下,只需要直接将质粒加入到细菌培养液中就行。...

你说的这个是最常用用热激吧,这也不是单单的把质粒加到大肠杆菌里。是这样的,细胞先经处理成细胞壁松散的状态,即感受态细胞,加入质粒混匀后冰浴20分,质粒沉降到细胞表面,42度热激1分钟,细胞通透性增大,质粒进入细胞内,再冰浴2分钟,质粒就出不来啦!就进入细胞内,松弛型质粒的话就可以拷贝出多份啦!也还有其他很多方法可以导入质粒。

发自小木虫Android客户端
9楼2015-09-17 00:36:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蘑菇头1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

热激转化感受态细胞,将质粒(20ng以上)加入感受态,冰上静置30min,42℃热激90s,冰上静置3~5min,超净台上加入1mL的液体LB,摇菌1~1.5h后离心1min,弃上清,留约100微升的液体,用枪吸打使之悬浮混匀,后涂布到加有相应抗生素的固体LB板上,37℃先正放0.5h,后翻板倒放8~12h即可
10楼2015-09-19 11:22:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 沙海林空 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 让我中一个面上吧! +9 大萍1987 2026-08-20 11/550 2026-08-21 08:19 by littlezl
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +22 yaoyewhu2008 2026-08-20 24/1200 2026-08-21 07:44 by DanielDDDD
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 言之凿凿,明天官网会通知放榜? +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见