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救命啊~~~~~~~关于 Human Park2 gene 和 TOPO vector
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这段时间遇到的实验问题实在非常头痛，请教大家一些问题，谢谢！ 实验目的：想把Human Park2基因克隆到 TOPO vector中。 实验流程：PCR扩增Human Park2基因——克隆PCR产物到TOPO vector中——转化到大肠杆菌DH5a中——质粒提取，酶切检测——测序 遇到问题：1.用pfu Turbo 酶PCR扩增不出Park2 基因， 后来在 Expand Long Template PCR 系统中可PCR扩增基因。 2. Expand Long Template PCR 系统扩增出基因很难克隆到 TOPO vector中。（转化效率其差，测序发现其中有错配碱基） 3. 以Expand Long Template PCR 扩增产物为模板，用pfu Turbo 酶扩增Park2 基因，转化后酶切检测后发现 质粒都是空的。（似乎一些引物的二聚体被克隆到质粒中了） 各位高人给点意见吧，有没有哪个实验做PARK2基因的，要不借点用用吧？ 救命啊~~~~~ |
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