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沙海林空

木虫 (正式写手)

[求助] 关于质粒提取遇到的问题 已有5人参与

我想用大肠杆菌来进行质粒的抽提,但我首先需要让质粒在大肠杆菌体内产生,
请问通常是用什么办法把原先的质粒导入到细菌体内?
生物小白,希望各位高手帮忙
谢谢
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兰兰园丁

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
沙海林空: 金币+15, ★★★很有帮助, 多谢 2015-09-17 19:19:11
引用回帖:
7楼: Originally posted by 沙海林空 at 2015-09-16 19:24:58
谢谢,我了解了一下,只需要直接将质粒加入到细菌培养液中就行。...

你说的这个是最常用用热激吧,这也不是单单的把质粒加到大肠杆菌里。是这样的,细胞先经处理成细胞壁松散的状态,即感受态细胞,加入质粒混匀后冰浴20分,质粒沉降到细胞表面,42度热激1分钟,细胞通透性增大,质粒进入细胞内,再冰浴2分钟,质粒就出不来啦!就进入细胞内,松弛型质粒的话就可以拷贝出多份啦!也还有其他很多方法可以导入质粒。

发自小木虫Android客户端
9楼2015-09-17 00:36:19
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
沙海林空: 金币+5 2015-09-16 19:25:33
利用大肠杆菌感受态细胞,可以将质粒导入到其中,一般常用DH5α感受态,导入方法常用的有,电转,和化转,在网上应该可以搜到
2楼2015-09-16 10:12:32
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ASWDR

金虫 (小有名气)

比较简单的可以用钙离子溶液处理,制备感受态细胞,再转质粒进去

发自小木虫Android客户端
3楼2015-09-16 10:17:35
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syhzlsd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
沙海林空: 金币+5 2015-09-16 19:25:21
用感受态细胞直接转化质粒就可以了!
4楼2015-09-16 10:44:15
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