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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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沙海林空

木虫 (正式写手)

[求助] 关于质粒提取遇到的问题 已有5人参与

我想用大肠杆菌来进行质粒的抽提,但我首先需要让质粒在大肠杆菌体内产生,
请问通常是用什么办法把原先的质粒导入到细菌体内?
生物小白,希望各位高手帮忙
谢谢
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Die-Luft-der-Freiheit-weht.
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蘑菇头1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

热激转化感受态细胞,将质粒(20ng以上)加入感受态,冰上静置30min,42℃热激90s,冰上静置3~5min,超净台上加入1mL的液体LB,摇菌1~1.5h后离心1min,弃上清,留约100微升的液体,用枪吸打使之悬浮混匀,后涂布到加有相应抗生素的固体LB板上,37℃先正放0.5h,后翻板倒放8~12h即可
10楼2015-09-19 11:22:03
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ksws0465326

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
沙海林空: 金币+5 2015-09-16 19:25:33
利用大肠杆菌感受态细胞,可以将质粒导入到其中,一般常用DH5α感受态,导入方法常用的有,电转,和化转,在网上应该可以搜到
2楼2015-09-16 10:12:32
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ASWDR

金虫 (小有名气)

比较简单的可以用钙离子溶液处理,制备感受态细胞,再转质粒进去

发自小木虫Android客户端
3楼2015-09-16 10:17:35
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syhzlsd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
沙海林空: 金币+5 2015-09-16 19:25:21
用感受态细胞直接转化质粒就可以了!
4楼2015-09-16 10:44:15
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