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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌液浓度的确定
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TT-Mac

新虫 (正式写手)

[求助] 菌液浓度的确定已有3人参与

各位大师，请帮忙解答。问题1：现在在测量菌液的od值，然后确定生长曲线，但是测出来的od很小，没到0.1。问题出在哪里了呢？（od600，大肠杆菌）
2、现在有个想法，不知道对不对，是这样的，假如测得标准曲线后，实验之前就拿配好的菌液去测od，对应的就可以知道菌液浓度（菌落数的范围），然后是不是可以根据：菌落数*稀释倍数=原始菌液浓度，这个来进行稀释到所需要的菌液浓度呢？即需要的菌落数范围
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阳光宅男
1楼2015-09-12 10:10:09
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二在奔三路上

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

实际使用过程中，OD值是一个比较准确反应大肠杆菌数的一个指标（排除掉其他生成物，培养基浑浊度等其他影响吸光度因素），LB培养基和无机盐培养基都可以用OD值判断菌体生长情况，个人认为，比稀释后的平板计数准确度要高，而且减小工作量。就是开始做标准曲线的时候麻烦一点儿，而且需要大量数平板的数据支持，而且，一般的分光光度计在OD值0.1-0.4之间数据比较准确，需要预估OD将其稀释至此区间，总之，这就是个熟练活儿，做多了就有准儿了
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11楼2015-12-29 10:24:07
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smilingworld

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2015-09-14 20:19:12
楼主说的第一个问题原因太多了，也太含糊了。培养了多少个小时，测OD值的时候菌液稀释了么，初试OD是多少，每一步都控制严格了，才能对现在出现的问题所想解决的方法。第二个问题，我要是没理解错的话，只能说做参考，但是不会很准确，测定的OD值所对应的菌落，只能是一个大概，不会说OD＝1.0时，CFU就是10的9次方这么准，即便根据“菌落数*稀释倍数=原始菌液浓度”这个来稀释得到所需菌液浓度了，也要在培养基上做CFU计数！
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2楼2015-09-12 15:34:31
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TT-Mac

新虫 (正式写手)
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2楼: Originally posted by smilingworld at 2015-09-12 15:34:31
楼主说的第一个问题原因太多了，也太含糊了。培养了多少个小时，测OD值的时候菌液稀释了么，初试OD是多少，每一步都控制严格了，才能对现在出现的问题所想解决的方法。第二个问题，我要是没理解错的话，只能说做参考 ...

谢谢，菌种培养了72个小时，其实想做的是标准曲线，测od的时候菌液稀释了10倍，100倍，1000倍，5000倍。但是出来的值很小，没到0.1，稀释到5000倍的菌液测得的od值是负数。还有就是初试od是什么意思呢？第一次接触，望指教。
第二个问题，其实能确定大概的菌落范围就可以了，所以“菌落数*稀释倍数=原始菌液浓度”来稀释是不是可行呢？
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阳光宅男
3楼2015-09-14 10:09:24
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smilingworld

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by TT-Mac at 2015-09-14 10:09:24
谢谢，菌种培养了72个小时，其实想做的是标准曲线，测od的时候菌液稀释了10倍，100倍，1000倍，5000倍。但是出来的值很小，没到0.1，稀释到5000倍的菌液测得的od值是负数。还有就是初试od是什么意思呢？第一次接触 ...

菌种培养了72个小时，稀释10倍后测OD时，数值没到0.1？那不稀释原液的OD是多少？初始OD是在你配置要测的菌液时，要测OD，要不然0小时的OD怎么计量，培养了72h也好，48h小时也好，怎么绘制最后的生长曲线。是可行的，只是反应大概原菌液的浓度。
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4楼2015-09-14 10:42:37
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TT-Mac

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by smilingworld at 2015-09-14 10:42:37
菌种培养了72个小时，稀释10倍后测OD时，数值没到0.1？那不稀释原液的OD是多少？初始OD是在你配置要测的菌液时，要测OD，要不然0小时的OD怎么计量，培养了72h也好，48h小时也好，怎么绘制最后的生长曲线。是可行的 ...

恩恩~我是想做od值与菌液浓度的标准曲线，从平板挑出一环菌后放入10ml0.9%无菌nacl溶液中，然后一直稀释，然后拿各稀释度测od，同时进行 倒平板计数，但是在600nm下的od值好小，没到0.1,甚至还有啊负数出现了，是怎么回事呢？
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阳光宅男
5楼2015-09-14 14:40:02
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蜡笔小旧87

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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zhang8826857: 金币+5, 鼓励新虫 2015-09-14 20:19:23
不行 OD与活菌数没有直接的对应关系， 只存在正相关。
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6楼2015-09-14 15:59:31
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蜡笔小旧87

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by TT-Mac at 2015-09-14 14:40:02
恩恩~我是想做od值与菌液浓度的标准曲线，从平板挑出一环菌后放入10ml0.9%无菌nacl溶液中，然后一直稀释，然后拿各稀释度测od，同时进行 倒平板计数，但是在600nm下的od值好小，没到0.1,甚至还有啊负数出现了，是怎 ...

出现负数 可能比色皿之间的差异，还有你的活菌数太低，OD的有一定的适用范围，大概菌数在107-109 次方之间，对应关系比较好，菌数太低OD值基本就太低了基本都接近零
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7楼2015-09-14 16:05:14
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smilingworld

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by TT-Mac at 2015-09-14 14:40:02
恩恩~我是想做od值与菌液浓度的标准曲线，从平板挑出一环菌后放入10ml0.9%无菌nacl溶液中，然后一直稀释，然后拿各稀释度测od，同时进行 倒平板计数，但是在600nm下的od值好小，没到0.1,甚至还有啊负数出现了，是怎 ...

为什么要放在生理盐水的溶液中？还有，楼主你培养了72个小时是在10ml0.9%无菌Nacl溶液中，不是在培养液中么？OD值小，说明菌没有生长，我以前也做过OD跟CFU的关系，但是我是挑取单一菌落后，然后测OD，OD值大概控制在0.1左右，倒平板计数。然后我是每隔12个小时测一回OD同时计CFU的数值，到培养120个小时左右，基本上能绘制出细菌的整个生长曲线以及与CFU的关系
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8楼2015-09-14 17:33:25
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TT-Mac

新虫 (正式写手)
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8楼: Originally posted by smilingworld at 2015-09-14 17:33:25
为什么要放在生理盐水的溶液中？还有，楼主你培养了72个小时是在10ml0.9%无菌Nacl溶液中，不是在培养液中么？OD值小，说明菌没有生长，我以前也做过OD跟CFU的关系，但是我是挑取单一菌落后，然后测OD，OD值大概控制 ...

嗯~，因为现在是想测od值与菌液浓度的关系，所以就挑取了在平板上培养的72个小时的菌落在无菌nacl中稀释，然后将各稀释度进行测od，并且将各稀释度进行倒平板计数。不弄生长曲线了。看到你说的方法很有用，以后测生长曲线的时候就会比较懂了。
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阳光宅男
9楼2015-09-14 21:25:10
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TT-Mac

新虫 (正式写手)
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6楼: Originally posted by 蜡笔小旧87 at 2015-09-14 15:59:31
不行 OD与活菌数没有直接的对应关系， 只存在正相关。

通过这个相关就可以确定大概的菌液浓度吗？或者说菌落数
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阳光宅男
10楼2015-09-14 21:25:43
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