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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 我用DNA基因组试剂盒抽提了几个细菌，但是跑了电泳后发现只有条带尾端亮
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陌眀奇妙

铁虫 (初入文坛)

[求助] 我用DNA基因组试剂盒抽提了几个细菌，但是跑了电泳后发现只有条带尾端亮 已有6人参与

【新人求助】请各位帮忙看一下，我用DNA基因组试剂盒抽提了几个细菌的基因组DNA，但是跑了电泳后发现只有条带尾端亮，我想要的菌为1500bp,请问我这个图是怎么回事？我想知道是出了什么问题，是基因组没提出来吗？因为都是试剂盒，我都是按照上面步骤进行，以前分离出别的细菌，现在没有找到错误的原因，为什么条带尾端特别亮？有没有人和我出现过相同的结果，求大神帮忙。

我用DNA基因组试剂盒抽提了几个细菌，但是跑了电泳后发现只有条带尾端亮
IMG_20150911_223707.jpg
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1楼 2015-09-11 23:06:14
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 陌眀奇妙 at 2015-09-12 16:40:34
本人新手，有很多不明白的地方，请问基因组怎么降解了？能给我讲一下降解的原因吗？如何优化条件呢？多谢了...

因为存在许多能够降解DNA的酶，比如细菌中许多DNase能够阻止外界DNA的入侵，其机制就是能够降解外界DNA.优化条件就是要优化消化的时间，整个提取的时间以及提取过程中各温度以及其他条件的控制。
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123456
10楼2015-09-12 21:00:48
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普通回帖

酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
下面的应该是rna。用rna酶试一下就知道了。如果试剂盒没有问题的话，可能需要加溶菌酶处理一下细菌再提。

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2楼2015-09-11 23:40:12
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renzhiq

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你想要的菌是1500bp?没明白，什么基因组会如此之小。你最好将你具体操作拿出来讨论，因为有RAN的降解产物，说明细胞是破了的，但基因组在哪步流失的，看了具体操作才能知道……

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3楼2015-09-12 08:17:26
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jiqinger

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是基因组降解了。可以优化一下条件
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123456
4楼2015-09-12 08:51:47
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huangxin2011

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
细菌基因组DNA相比于其它真核生物要脆弱很多，我们这边不用试剂盒，到后面的步骤枪头（tips）前端都要剪掉一部分的，太细容易使DNA断裂
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5楼2015-09-12 11:58:11
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见神一笑

木虫 (著名写手)
最有可能是rRNA污染，而且基因组DNA基本没提出来

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好好努力
6楼2015-09-12 12:22:04
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陌眀奇妙

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酒家何处 at 2015-09-11 23:40:12
下面的应该是rna。用rna酶试一下就知道了。如果试剂盒没有问题的话，可能需要加溶菌酶处理一下细菌再提。

试剂盒应该没有问题，因为我以前用试剂盒提出来过，试剂盒第一步是菌液离心，然后就是加加入溶菌酶的buffer digestion水浴，所以也用溶菌酶处理了。
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7楼2015-09-12 16:33:35
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陌眀奇妙

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jiqinger at 2015-09-12 08:51:47
应该是基因组降解了。可以优化一下条件

本人新手，有很多不明白的地方，请问基因组怎么降解了？能给我讲一下降解的原因吗？如何优化条件呢？多谢了
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8楼2015-09-12 16:40:34
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陌眀奇妙

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by huangxin2011 at 2015-09-12 11:58:11
细菌基因组DNA相比于其它真核生物要脆弱很多，我们这边不用试剂盒，到后面的步骤枪头（tips）前端都要剪掉一部分的，太细容易使DNA断裂

请问你们提取基因组DNA的步骤是什么样的呢，能告诉我一下吗？万分感谢
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9楼2015-09-12 16:42:08
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