| 查看: 1262 | 回复: 13 | |||
[求助]
pcr怎样才能扩出15k以上的目的条带？ 已有8人参与
|
|||
|
从全基因组中pcr一段15k的片段，始终不能获得目的条带。试过了各种酶，优化了条件，试过增加镁离子浓度，最后用Ex-taq只能够获得8000bp以上的弥散条带，不知道该怎么办？求高人帮助，不胜感激！ 50ul体系：Ex-taq 0.25 Buffer 10* 5 dNTP(0.25) 4 模板引物各1 Mgcl2 0.6 pcr 条件：98 30s 98 10s 55 30s 72 30min 72 7min 进行了10个cycles 结果如下： 第一张是0.6、 0.8ul的Mgcl2 第二张是以上两管胶回收以后作为模版相同条件重新pcr后的结果  1.png  2.png |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有140人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
evangelina
无虫 (小有名气)
- 应助: 72 (初中生)
- 金币: -31.9
- 红花: 3
- 帖子: 135
- 在线: 58.4小时
- 虫号: 3180737
- 注册: 2014-05-05
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
2楼2015-08-31 12:02:25
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - 应助: 517 (博士)
- 金币: 462.9
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
3楼2015-08-31 13:03:29
4楼2015-08-31 13:32:08
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
- MolEPI: 1
- 应助: 172 (高中生)
- 金币: 646.4
- 散金: 170
- 红花: 16
- 帖子: 863
- 在线: 144.9小时
- 虫号: 3603131
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
| 15kb是简单模板还是基因组模板啊，一般的热启动Taq酶已经算不错了能扩增10kb以下的，15kb的话长片段酶就能达到要求了，要注意优化buffer等条件，看看这篇资料吧 http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html 关于扩增选择，应该对你有用吧 |
5楼2015-09-01 10:00:52
6楼2015-09-01 14:04:08
7楼2015-09-02 09:12:12
8楼2015-09-02 09:13:14
791945301
新虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 428.4
- 帖子: 36
- 在线: 23.8小时
- 虫号: 2798201
- 注册: 2013-11-13
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
9楼2015-09-02 10:57:53
10楼2015-09-02 13:35:26