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pcr怎样才能扩出15k以上的目的条带？ 已有8人参与
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从全基因组中pcr一段15k的片段，始终不能获得目的条带。试过了各种酶，优化了条件，试过增加镁离子浓度，最后用Ex-taq只能够获得8000bp以上的弥散条带，不知道该怎么办？求高人帮助，不胜感激！ 50ul体系：Ex-taq 0.25 Buffer 10* 5 dNTP(0.25) 4 模板引物各1 Mgcl2 0.6 pcr 条件：98 30s 98 10s 55 30s 72 30min 72 7min 进行了10个cycles 结果如下： 第一张是0.6、 0.8ul的Mgcl2 第二张是以上两管胶回收以后作为模版相同条件重新pcr后的结果  1.png  2.png |
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3楼2015-08-31 13:03:29
evangelina
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18761615793
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
| 15kb是简单模板还是基因组模板啊，一般的热启动Taq酶已经算不错了能扩增10kb以下的，15kb的话长片段酶就能达到要求了，要注意优化buffer等条件，看看这篇资料吧 http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html 关于扩增选择，应该对你有用吧 |
5楼2015-09-01 10:00:52
30