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PCR产物大小比引物距离大很多，什么原因
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如图，最左边是DL500maker，最上面是500pb，间隔100bp吗，maker右边三个是三个引物P出来以后的结果，第一条不太明显，大概450bp左右，第二个有两条带，第三个大概400bp左右，现在的问题是，我用的NCBI在线设计的引物，三个引物的产物大小应该是145bp，138bp，172bp，现在pcr产物的大小明显大很多，这是什么原因，请各位大侠多多指教。 1.jpg |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-08-27 22:59:04
爱起点: 金币+1, 谢谢 2015-08-29 21:19:34
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爱起点: 金币+1, 谢谢 2015-08-29 21:19:34
| 可能是你引物设计不太正确，方便给一下序列么？ 导致扩出来的PCR产物不是你想要扩增的目的基因。至于中间第二泳道出现了两条带，只能说明，你的产物不纯。第一条带没有说明你要么点样出了问题，要么是你的PCR引物不正确，导致不能扩增出产物。第三条带不那么清晰，可能是聚合酶加少了或者是聚合酶活性较低，或者是dNTP的量过少等等。终其原因，最好先重新设计一下引物，然后一步步重新认真做！祝君成功！ |
6楼2015-08-27 21:15:14
铁拳虎
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