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hanyu426980

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切及测序问题 已有2人参与

本人使用PETDuet-1双表达载体连入两个目的基因,两个基因已经连进去,其中一个经测序结果正确,另外一个上游选用BamH I酶切位点,下游选用SalI酶切位点,载体上BamHI在SalI酶切位点前面,但是连接后测序结果出现SalI在前而且目的基因序列反向互补。
   本应该是 BamH I-目的基因-SalI,但现在是SalI-目的基因反向互补-BamHI这样的顺序连入载体,不知是何原因,求大神解答。
  注:不是测序上下游问题,已经和载体序列比对过,真的是反向互补连进去的,且酶切位点不同也连进去了,载体序列之前也测序过,是正确的。
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hanyu426980

新虫 (初入文坛)

大神何在
2楼2015-08-15 16:19:03
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sky0328

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

想知道你的第2个片段是如何加入的酶切位点,如果是引物两段加入的,是否当时把上下游引物的酶切位点加反了?
3楼2015-08-22 13:44:28
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hanyu426980

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sky0328 at 2015-08-22 13:44:28
想知道你的第2个片段是如何加入的酶切位点,如果是引物两段加入的,是否当时把上下游引物的酶切位点加反了?

引物两端加入的,送去合成的引物序列酶切位点不是反的,合成应该不会出现这种问题。比如我上游BamHI酶切位点确实是连在基因的上游,但是载体上BamHI虽然是在SalI前面,但是却连在了SalI该在的位置。分子这东西真是搞不懂,什么奇怪的事都能出现。
4楼2015-08-24 11:04:43
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

petduet-1在哪里买的,求助
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
5楼2015-09-07 15:01:29
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hanyu426980

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2015-09-07 15:01:29
petduet-1在哪里买的,求助

上海吉然
6楼2015-09-09 10:48:12
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by hanyu426980 at 2015-09-09 10:48:12
上海吉然...

好吧,谢谢
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
7楼2015-09-09 13:04:48
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