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双酶切及测序问题 已有2人参与
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本人使用PETDuet-1双表达载体连入两个目的基因，两个基因已经连进去，其中一个经测序结果正确，另外一个上游选用BamH I酶切位点，下游选用SalI酶切位点，载体上BamHI在SalI酶切位点前面，但是连接后测序结果出现SalI在前而且目的基因序列反向互补。 本应该是 BamH I-目的基因-SalI，但现在是SalI-目的基因反向互补-BamHI这样的顺序连入载体，不知是何原因，求大神解答。 注：不是测序上下游问题，已经和载体序列比对过，真的是反向互补连进去的，且酶切位点不同也连进去了，载体序列之前也测序过，是正确的。 |
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