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mingfengpbpb

木虫 (正式写手)

[求助] 磷酸盐缓冲液流动相 已有2人参与

1、我在做一个抗生素的含量测定,流动相是磷酸盐缓冲液:乙腈88:12,C18柱子,一直不太明白,流动相里加盐的作用是什么?是为了保持PH值不变吗?
2、做了两个月左右了,柱子就分不开峰了,工程师过来把填料重新装了一下,然后我用流动相走了几针标品(用水配制的),峰型非常不好,峰面积还很低。然后换用水:乙腈95:5冲柱子,结果在2min左右出了一个大峰,随后我又进了一针标品,还是用的水:乙腈95:5,结果在9min出峰,这样是说明流动相中乙腈比例太高了吗?或者是其他的什么原因呢?请各位大神指点,不胜感激。
3、流动相带盐太伤柱子了,能不能不加盐呢?
4、药典里流动相是磷酸盐:乙腈98:2,当时用这根柱子时,我是从98:2一点点加大有机相比例的,为的是把保留时间提前到合适的位置。
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自强不息
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研二的小五

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by lingshu at 2015-08-10 18:51:20
说反了吧   乙腈的粘度在0.4左右   甲醇的粘度在0.6左右    而且水与醇类可能提高固定相的水解速率   所以对于C18来说  乙腈是保存色谱柱的良好溶剂
...

多数柱子说明书会说明将色谱柱保存在什么体系中,实验室用的C18,说明书中说明是保存在90%以上的甲醇中,实验室体系用的也是用甲醇冲。
10楼2017-11-16 09:05:17
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raulsam1984

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mingfengpbpb: 金币+2 2015-08-06 15:57:27
楼主,第一个问题:加入磷酸盐是对C18柱子有一定的改性作用,增强其分离的能力,及维持流动相在一定的ph环境中,保持必测物保持在一定分子形态中,不易发生离解。
第二个问题:水:乙腈=95:5的话,是不是太伤反相柱了,水相太高会伤柱。峰型不好应该是你流动相的ph值环境的问题,尝试加入磷酸盐调节环境。
第三个问题:这个答案需要视分析情况而定,如果可以加入磷酸、甲酸、乙酸等,也可以。
祝楼主实验成功~~~~~~~
2楼2015-08-06 11:26:38
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mingfengpbpb

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by raulsam1984 at 2015-08-06 11:26:38
楼主,第一个问题:加入磷酸盐是对C18柱子有一定的改性作用,增强其分离的能力,及维持流动相在一定的ph环境中,保持必测物保持在一定分子形态中,不易发生离解。
第二个问题:水:乙腈=95:5的话,是不是太伤反相柱 ...

流动相里一直都是有磷酸盐的。我这样做完了用水:乙腈90:10冲柱子可以吗?一般都要冲多久呢?
自强不息
3楼2015-08-06 16:03:46
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raulsam1984

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
mingfengpbpb: 金币+4 2015-08-10 08:58:04
mingfengpbpb: 金币+4 2015-08-10 08:58:46
引用回帖:
3楼: Originally posted by mingfengpbpb at 2015-08-06 16:03:46
流动相里一直都是有磷酸盐的。我这样做完了用水:乙腈90:10冲柱子可以吗?一般都要冲多久呢?...

楼主,虽然乙腈也是有机溶剂,但希望最好不要用乙腈来冲柱。因为乙腈的粘度比甲醇大,如果你是用waters2695的液相,很容易导致单向阀的红宝石粘住了,以后会漏液的。冲柱子的原则是冲20倍的柱体积,水:乙腈的比例从90:10→10:90→100%乙醇。C18柱子保存在纯甲醇里面比较好。
4楼2015-08-07 09:40:01
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