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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 不同PH值流动相的配制
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xcbjl1234

铜虫 (小有名气)

[求助] 不同PH值流动相的配制已有1人参与

各位，在此想请问一个关于不同PH值的磷酸盐缓冲液的配制问题，以前做液质较多，通常都采用不同浓度的有机酸，现在做药物分析，发现很多液相的分析方法都是采用磷酸盐的缓冲液做流动相，并且好多还是等度分析的，经验丰富的同行希望赐教几个问题：
1.为什么液相分离常采用磷酸盐缓冲液？采用不同浓度的甲酸或TFA可以吗？是不是这样每次配制的PH会不准确，导致RT或分离度有变化，如果我能确保每次都一致，能否使用？
2. 有时是等度分离？但我的有关物质较多，等度不能分开，必须要采用梯度，这样基线就会不平，看着不好看，并且杂质积分不准确，有解决的办法吗？
3. 最搞不明白的就是，配制不同PH值的磷酸盐缓冲液怎么配制？比如我想配制PH为2.0、2.5、3.0的流动相，我根据药典的缓冲液配制方式配制后使用，感觉离子浓度较大，有机相泵老出问题，一会没压力，一会压力高，一会压力又不稳，很奇怪，A泵用的磷酸盐，可B泵老出问题，搞不懂。然后看别的文章好多都是用多少mmol的磷酸盐，然后用磷酸调PH值至所需要的，现在问题就是，这个磷酸盐通常用什么呢？有磷酸二氢钠，磷酸二氢钾、磷酸二氢铵？用哪种有什么差异吗？可能还有我不知道的别的盐。
4. 那么配制这个缓冲盐到底是用药典的缓冲液配制方式还是随意配制盐的浓度，然后用磷酸调呢？

希望在此行业熟悉的朋友能赐教，谢谢！
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1楼2015-01-04 13:14:03
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xcbjl1234: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-01-04 15:35:57
1. 单独添加甲酸或者TFA没有缓冲效果。
2. 肯定要用梯度，等度分不开根本无法得到令人信服的结果。基线不平是正常情况，不会影响积分。
3. 因为A和B在混合的时候磷酸盐会析出，不要配的浓度太高。用哪种盐都行，pH高了调低低了调高，最后达到所需要的pH就行了。
4. 怎么配都行，但是每次都得保持一致。

另外，梯度洗脱的时候有机相比例不能太高，否则盐会析出。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
2楼2015-01-04 13:44:52
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雨雪冰天

金虫 (小有名气)
不一定非得要加缓冲盐的，如果不加缓冲盐就能分开，直接加三氟乙酸、磷酸、二乙胺什么的调整下峰型就好了
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8楼2015-01-04 15:50:59
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雨雪冰天

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xcbjl1234 at 2015-01-04 15:38:21
做液质时会用醋酸铵的缓冲溶液做流动相，在液相里常见的就是磷酸盐，为什么都不爱用醋酸盐呢？醋酸盐还可以和高比例的有机相混合呢，也很方便啊！是的，我是做新药，也曾参考过方法，用的辛烷磺酸钠，气泡太多，不 ...

庚烷磺酸钠加进去要多超声一下，一般不会很多气泡的，我都用0.1%的
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9楼2015-01-04 15:52:15
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xcbjl1234

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by archbishop at 2015-01-04 13:44:52
1. 单独添加甲酸或者TFA没有缓冲效果。
2. 肯定要用梯度，等度分不开根本无法得到令人信服的结果。基线不平是正常情况，不会影响积分。
3. 因为A和B在混合的时候磷酸盐会析出，不要配的浓度太高。用哪种盐都行，p ...

谢谢！还想问下，我也知道有机酸没有缓冲效果，但不知道具体的这个缓冲效果指的是什么？在哪方面有体现？多谢！
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3楼2015-01-04 14:20:17
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archbishop

禁虫 (职业作家)

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引用回帖:
3楼: Originally posted by xcbjl1234 at 2015-01-04 14:20:17
谢谢！还想问下，我也知道有机酸没有缓冲效果，但不知道具体的这个缓冲效果指的是什么？在哪方面有体现？多谢！...

缓冲溶液的作用是在一定范围内维持体系的pH稳定，加入酸碱或者体积改变时pH不会发生显著变化。因为pH会影响峰形、分离度等，所以要用缓冲溶液。缓冲溶液必须要有缓冲对，只加甲酸或者三氟乙酸没有缓冲对无法起到缓冲pH的作用。
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4楼2015-01-04 14:30:04
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xcbjl1234

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by archbishop at 2015-01-04 14:30:04
缓冲溶液的作用是在一定范围内维持体系的pH稳定，加入酸碱或者体积改变时pH不会发生显著变化。因为pH会影响峰形、分离度等，所以要用缓冲溶液。缓冲溶液必须要有缓冲对，只加甲酸或者三氟乙酸没有缓冲对无法起到缓 ...

谢谢！如果ph的细小变化对我的分离度及峰形没有很大的影响，那是不是也可以用有机酸作为流动相，或者我的化合物极性很小必须高比例有机相冲洗，那也不能用磷酸盐了啊！另外就是，如果我的RT有变化，变化多大事可以接受的？非常感谢，这些都是我一直困惑的问题。另，我不知道怎么送金币啊，不好意思！
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5楼2015-01-04 14:48:14
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archbishop

禁虫 (职业作家)

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5楼: Originally posted by xcbjl1234 at 2015-01-04 14:48:14
谢谢！如果ph的细小变化对我的分离度及峰形没有很大的影响，那是不是也可以用有机酸作为流动相，或者我的化合物极性很小必须高比例有机相冲洗，那也不能用磷酸盐了啊！另外就是，如果我的RT有变化，变化多大事可以 ...

不谢。
1. 做液质联用加酸是为了提高质谱响应，如果要稳定pH也得用缓冲溶液。是否要添加改性剂是根据具体需求来确定的，假如不加改性剂就可以得到理想的结果那就不要添加。你可以参考文献或者标准，最好是重复现有的成熟的方法。不过我看你的意思好像是要重新开发方法。
2. 保留时间的RSD小于等于1%
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6楼2015-01-04 15:15:27
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xcbjl1234

铜虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by archbishop at 2015-01-04 15:15:27
不谢。
1. 做液质联用加酸是为了提高质谱响应，如果要稳定pH也得用缓冲溶液。是否要添加改性剂是根据具体需求来确定的，假如不加改性剂就可以得到理想的结果那就不要添加。你可以参考文献或者标准，最好是重复现有 ...

做液质时会用醋酸铵的缓冲溶液做流动相，在液相里常见的就是磷酸盐，为什么都不爱用醋酸盐呢？醋酸盐还可以和高比例的有机相混合呢，也很方便啊！是的，我是做新药，也曾参考过方法，用的辛烷磺酸钠，气泡太多，不好用，所以想换种方法。多谢！
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7楼2015-01-04 15:38:21
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主
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7楼: Originally posted by xcbjl1234 at 2015-01-04 15:38:21
做液质时会用醋酸铵的缓冲溶液做流动相，在液相里常见的就是磷酸盐，为什么都不爱用醋酸盐呢？醋酸盐还可以和高比例的有机相混合呢，也很方便啊！是的，我是做新药，也曾参考过方法，用的辛烷磺酸钠，气泡太多，不 ...

1. 通常的说法是，磷酸盐紫外吸收低，由于是三元酸，缓冲范围广，常见的硅胶基质的色谱柱耐受pH范围大多都在2-9，在这个范围内磷酸盐都可以满足。实际上你可以根据需要的pH选择其他缓冲盐，比如乙酸铵。
2. 辛烷磺酸钠是离子对试剂，你做的化合物可能保留比较弱，如果换别的缓冲盐可能不会有好的效果。
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10楼2015-01-04 15:52:26
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