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不同PH值流动相的配制 已有1人参与
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各位，在此想请问一个关于不同PH值的磷酸盐缓冲液的配制问题，以前做液质较多，通常都采用不同浓度的有机酸，现在做药物分析，发现很多液相的分析方法都是采用磷酸盐的缓冲液做流动相，并且好多还是等度分析的，经验丰富的同行希望赐教几个问题： 1.为什么液相分离常采用磷酸盐缓冲液？采用不同浓度的甲酸或TFA可以吗？是不是这样每次配制的PH会不准确，导致RT或分离度有变化，如果我能确保每次都一致，能否使用？ 2. 有时是等度分离？但我的有关物质较多，等度不能分开，必须要采用梯度，这样基线就会不平，看着不好看，并且杂质积分不准确，有解决的办法吗？ 3. 最搞不明白的就是，配制不同PH值的磷酸盐缓冲液怎么配制？比如我想配制PH为2.0、2.5、3.0的流动相，我根据药典的缓冲液配制方式配制后使用，感觉离子浓度较大，有机相泵老出问题，一会没压力，一会压力高，一会压力又不稳，很奇怪，A泵用的磷酸盐，可B泵老出问题，搞不懂。然后看别的文章好多都是用多少mmol的磷酸盐，然后用磷酸调PH值至所需要的，现在问题就是，这个磷酸盐通常用什么呢？有磷酸二氢钠，磷酸二氢钾、磷酸二氢铵？用哪种有什么差异吗？可能还有我不知道的别的盐。 4. 那么配制这个缓冲盐到底是用药典的缓冲液配制方式还是随意配制盐的浓度，然后用磷酸调呢？ 希望在此行业熟悉的朋友能赐教，谢谢！ |
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5楼2015-01-04 14:48:14
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1. 单独添加甲酸或者TFA没有缓冲效果。 2. 肯定要用梯度，等度分不开根本无法得到令人信服的结果。基线不平是正常情况，不会影响积分。 3. 因为A和B在混合的时候磷酸盐会析出，不要配的浓度太高。用哪种盐都行，pH高了调低低了调高，最后达到所需要的pH就行了。 4. 怎么配都行，但是每次都得保持一致。 另外，梯度洗脱的时候有机相比例不能太高，否则盐会析出。 |
2楼2015-01-04 13:44:52
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4楼2015-01-04 14:30:04
