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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 关于TMB显色，
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陶然悦

金虫 (正式写手)

[求助] 关于TMB显色， 已有2人参与

请大神解答TMB和辣根过氧化物酶的作用机理？做ELISA时，一般先加过氧化氢，再加TMB，顺序能否调过来？
显色后为什么颜色会变？发生了哪些化学反应？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-07-07 12:24:43
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茗香薏然

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小丢丢超可爱 at 2015-07-07 13:42:06
辣根过氧化物酶与过氧化氢反应释放氧自由基，然后氧自由基与TMB显色底物发生反应，显色后会变蓝，加入1NHcl终止后变黄，染后可拿去酶标仪读数

请问一下，我是新手，我在做过氧化氢酶模拟物，一种复合材料，用它传感过氧化氢，我是先在缓冲溶液中加入TMB,再加入H2O2,然后加入材料，反应几分钟后拿到紫外去测量吸光度，没有加入终止剂，所以测量时间要求很严格，不太好控制，怎么办？那如果我加了终止剂盐酸后，和HRP一样要在450nm处侧吸光度么？
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5楼2015-12-26 10:52:16
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swlsangon

木虫 (小有名气)

快乐的木虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们在做TMB显色是都是配置好A液与B液，在使用时取等量A和B混合后加到96孔板里，之后加终止液。在配制A和B时先用甲醇溶解TMB.
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生命在于运动
2楼2015-07-07 12:39:32
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小丢丢超可爱

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
辣根过氧化物酶与过氧化氢反应释放氧自由基，然后氧自由基与TMB显色底物发生反应，显色后会变蓝，加入1NHcl终止后变黄，染后可拿去酶标仪读数
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3楼2015-07-07 13:42:06
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陶然悦

金虫 (正式写手)
已找到正确答案，不用再回答了，谢谢！

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-07-12 13:42:12
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